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    综合项目服务

CRISPR/Cas9 (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)系统是继ZNF和TALENS技术之后的第三代基因编辑技术,被广泛应用于细胞水平和个体水平基因编辑细胞系和模式动物的建立。
      点击这里查看 CRISPR技术简介

CRISPR/Cas9系统利用sgRNA/Cas9复合体识别并在DNA特异位点造成双链断裂,利用细胞自身修复机制或者与外源DNA同源重组实现基因敲、敲入和序列突变。
金开瑞应用CRISPR/Cas9技术,为您提供细胞系基因敲除/敲入/突变等服务,全方位满足您对基因功能研究方面的各项需求。

技术优势

操作简单,靶向精确性更高;
可实现对多个靶基因位点或多个靶基因的同时敲除/敲入/突变;
适用于人、大鼠、小鼠以及部分其他哺乳动物等各种细胞系的靶向敲除/敲入/突变。

服务内容

基因敲除细胞系建立;
基因敲入细胞系建立;
基因定点突变细胞系建立。

服务流程

  • 接收订单
  •  
  • 基因评估
  •  
  • sgRNA设计
  •  
  • 表达sgRNA和Cas9蛋白的慢病毒包装
  •  
  • 感染细胞
  •  
  • 细胞药物筛选
  •  
  • 混合细胞PCR检测
  •  
  • 细胞分孔,挑取单克隆
  •  
  • 单克隆扩大培养后PCR测序检测
  •  
  • 结果交付

客户提供

目的基因序列信息(Gen Bank Accession number、Gene ID、关键词);
细胞类型及名称(也可选择由金开瑞代购),细胞培养条件。

最终交付

sgRNA序列;
基因敲除/敲入/突变单克隆细胞系;
sgRNA-Cas9基因敲除/敲入/突变质粒鉴定测序结果;
结题报告(包括实验步骤、测序结果及相关原始图片)。

案例展示

Cas9技术敲除细胞系构建案例:

Step 1: sgRNA设计

Step 2: 细胞抗药性筛选预实验

Step 3:转染效率测试:明场和绿色荧光

Step 4: 药物筛选、单克隆培养及单克隆细胞系靶点检测



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