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长链非编码RNA(long noncoding RNA, lncRNA)指的是长度超过200nt的RNA分子。它们不编码蛋白,位于细胞核或胞质内,具有保守的二级结构,可与蛋白质、DNA和RNA相互作用,通过多种机制(如基因印记、染色质重塑、细胞周期调控、剪接调控、mRNA降解和翻译调控等)在多种层面上(如表观遗传学、转录调控及转录后调控等)调控基因的表达水平。
       lncRNA参与多种生物学过程的调控,在多种生命活动中发挥重要作用,该领域的关注度也日益增高,已成为继信使RNA(mRNA)、小RNA(microRNA、siRNA等)之后功能基因组学最火热的研究领域。

金开瑞现提供下述lncRNA研究服务:
       1、确定lncRNA表达
       利用q-PCR技术检测lncRNA在不同组织中的表达水平。
       2、探究lncRNA特点
       (1)通过QD-FISH原位杂交技术定位;或者通过细胞核质分离试剂盒得到RNA,qRT-PCR检测其分布;
       (2)全长序列试验方法:通过RACE得到lncRNA完整的全长序列。
       3、lncRNA的功能研究
       lncRNA较长,承载的信息量多,更容易形成高级结构,其功能具有多样化和特异性强的特点。类似于miRNA,探讨lncRNA功能可用 gain/loss of function 策略,过表达或沉默lncRNA后观察表型。即研究lncRNA功能获得后或者功能缺失后对细胞增殖、凋亡、侵袭、转移与克隆形成,以及病毒的转录复制等的影响。
       (1)功能获得性研究
       构建lncRNA过表达质粒或者慢病毒、腺病毒包装载体。
       (2)功能缺失性研究
       siRNA、shRNA、CRISPR/cas9。
       4、检测结合蛋白质
       利用体外转录,RNA pull down, MS等技术手段检测与RNA绑定的蛋白质。
       5、预测并验证作用的miRNA
       利用软件预测miRNA在lncRNA的作用靶点,并进行验证。
       6、表达调控
       将lncRNA表达与其他领域相结合,解释其调控机理。(1)DNA甲基化和乙酰化:可通过检测相应基因甲基化、乙酰化差异与lncRNA结合分析。(2)转录因子:研究lncRNA与转录因子的调控机制。

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