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RIP常见问题与解答

  • Q:什么是RIP?

    RIP 技术(RNA Binding Protein Immunoprecipitation Assay,RNA 结合蛋白免疫沉淀)主要是运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,经过分离纯化就可以对结合在复合物上的RNA 进行q-PCR验证或者测序分析。RIP 是研究细胞内RNA 与蛋白结合情况的技术,是了解转录后调控网络动态过程的有力工具,可以帮助我们发现miRNA 的调节靶点。

    根据需求,金开瑞可以提供RNA/蛋白、RNA/RNA互作验证RIP技术服务。

  • Q:在金开瑞做RIP,需提供什么,可获得什么结果?

    在金开瑞进行RIP技术服务,您需要提供目的蛋白抗体(可用于IP)及其说明书;需检测的细胞样品;目的基因、目的蛋白信息。

    实验完成后,金开瑞所交付的结果包含:原始数据、结果图片(包括阴性对照结果);标准实验报告(包括详细的材料与方法);SCI标准Result Figure。

  • Q:RIP试验主要应用哪些方面?

    1) 已知蛋白与已知RNA互作QPCR验证;已知蛋白与未知RNA互作二代测序筛选。

    2) 已知RNA与已知RNA互作QPCR验证;已知RNA与未知RNA互作二代测序筛选。

  • Q:RIP试验需要注意些什么?

    1) 防止RNA与蛋白非特异性结合。

    2) 避免RNA蛋白质结合被破坏。

    3) 避免外源RNase污染。

    4) 抑制内源RNase的活性。

    5) 避免RNA结合蛋白的降解;

    6) 选择适合做RIP的抗体,一定要是IP级别的抗体。

    7) 细胞的选择,对于需要做转染实验的需要选择转染效率较高的、RNA在细胞中本底表达量要相对较高的

  • Q:为什么抗体无法沉淀RIP裂解液中的目标蛋白?

    1) 先进行IP或者WB,测试抗体可以与目标RBP结合。

    2) 另选一个能与抗原其他表位结合的抗体。

    3) 尽可能选用密理博RIPAb+抗体。

    4) 稀释抗体成浓度梯度,进行IP测试。

    5) 4℃过夜孵育抗体与RIP裂解液。

    6) 确定抗体类型与Protein A/Protein G匹配。

  • Q:RIP可以分提核浆的RNA-蛋白质复合物吗?

    理论上,可以采用能分别抽提核浆蛋白的蛋白抽提kit先分离样本,再进行RIP实验。但需要特别注意的是所用kit中的reagent不能有RNase和DNase,以及要能与下游的抗体beads孵育兼容。