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细胞检测常见问题与解答

  • Q:细胞增殖相关实验有哪些?

    细胞增殖相关实验包括有MTT/CCK8、EdU掺入、(软琼脂)克隆形成和细胞周期检测。

    MTT/CCK8:一般在基因表达水平干预、细胞因子或药物干预等条件下,培养细胞后加入MTT/CCK8,反应的是细胞总体代谢活力水平,通过多孔板光度计(酶标仪)获取数值,可绘制细胞的生长曲线。

    EdU掺入:在细胞培养过程中EdU,通过DNA合成水平,反应细胞增殖状态及比例,后续通过荧光显微镜或流式细胞仪获取数据。

    (软琼脂)克隆形成:不同干预处理的细胞,在培养孔板中或铺有低熔点琼脂糖的培养孔板中,培养2周左右观察其形成单克隆的能力。软琼脂克隆形成主要用于悬浮细胞,或者在研究贴壁细胞的抗失巢凋亡(anoikis)能力时。

    细胞周期:实验细胞经过PI染色后,进行流式细胞术分析,可以获得细胞在各个细胞周期(G1/G2/M)的分布比例。

  • Q:什么是Transwell迁移/侵袭?

    Transwell小室上下层由聚碳酸酯膜分隔,膜上有3-8μm不同规格孔径的小孔。不铺Matrigel胶时细胞的穿膜过程体现其迁移能力;当铺有Matrigel胶时细胞穿膜需分泌基质金属蛋白酶(MMPs)等基质水解酶类,此时体现的是细胞的侵袭能力。所得数据为显微镜下拍照及细胞计数结果。

  • Q:什么是Annexin V/PI双染?

    Annexin V可特异性结合于凋亡细胞膜外翻的磷脂酰丝氨酸,PI只能穿透晚期/死亡细胞的细胞膜对核着色,使用Annexin V/PI双染可以将未凋亡、早期凋亡、晚期凋亡的细胞群体比例显示出来,数据通过流式细胞术或荧光显微镜获得。

  • Q:什么是PI染色法?

    DNA染料碘化丙啶PI(Propidium Iodide,PI)可以嵌入到DNA双螺旋碱基之间并与之结合,结合量与DNA的含量成正比,而PI的量是与荧光强度是成正比的,后者可以通过直方图中的通道数反应出来。

    该实验用于肿瘤病理学中判断肿瘤的增殖状态和倍体分析;用于分析药物对细胞增殖的影响。

  • Q:细胞类检测需要多少样品?

    每一份独立样品的最低需要量,动物细胞>1x10^7,动物组织>400mg,植物组织>2g。请尽量提供更多样品,便于我方进行预实验、提高成功率。也要看样本类型和具体做哪种或哪几种实验,如果是采集困难或者特别珍贵的样本,需另外评估。

    细胞可以提供培养瓶或冻存细胞,由我方验收后培养(或复苏);也可以收取足量细胞后速冻、-80保存至寄送。

    动植物组织样品需在离体后尽快液氮速冻、-80保存至寄送。植物组织尽量选取幼嫩新鲜部分。

    样品寄送须使用足量干冰。