技术支持

基因合成常见问题与解答

  • Q:金开瑞基因合成有什么优势?

    1)可以合成任何基因,包括含重复序列、高GC含量、发夹结构、连续单一碱基重复等富含特殊结构的复杂基因;

    2)专利的密码子优化技术提高了蛋白的表达量及其可溶性;

    3)普通PCR克隆方法构建组织特异性cDNA文库是费时费钱的;而基因合成获得的基因不仅成本低而且无突变、准确,保证后续实验的进行。

    4)不需要依赖模板以及酶切位点。

    5)金开瑞基因合成周期短,公司严格按照与客户签定的基因合成服务协议和保密合同执行服务,全面保护您的信息安全。

  • Q:金开瑞可以合成一些难度较大的基因么?收费如何?

    金开瑞拥有领先的基因合成技术平台,目前已成功合成多例高GC、低GC含量、正向或反向重复序列等。同时,我们会仔细评估您的每一条难度序列,向您提供专业的技术支持,为您的项目量身打造专业的实验方案。

    难度序列基因的合成主要难在PCR扩增和测序部分,为保证项目周期和质量,需要大量的重复工作,所以成本相对来说高很多,收费也会高于普通基因。

  • Q:金开瑞基因合成的周期如何?

    在1500bp以内的普通序列,金开瑞可以保证在5-8工作日内完成。

    金开瑞除了传统的用引物用PCR外,还有较先进的无需引物无需PCR合成技术,并且有较丰富的经验,可以缩短实验周期。

  • Q:金开瑞基因合成的交付产品有哪些,以什么形式发货?

    金开瑞基因合成最终交付产品包含:质粒干粉;固体穿刺菌(默认菌株为DH5a或TOP10)或者甘油菌,默认情况下提供穿刺菌。穿刺菌与质粒冻干粉常温运输,甘油菌冰盒运输。

    同时,金开瑞会以邮件形式发送详细的电子版报告,包括测序结果,标准序列及测序结果的序列比对文件,COA报告,如果需要其他数据或对报告信息有疑问联系技术支持。

  • Q:金开瑞基因合成服务提供的数据报告包含哪些文件,每个文件需要使用什么软件打开?

    您的订单完成后,金开瑞会通过邮箱给你发送订单服务数据报告,数据报告共含有4 类文件,分别为:

    Seq格式文件——根据您提供订单序列生成的目标序列文件,可以使用DNASTAR 软件打开;

    ab1格式文件——测序报告峰图,可以使用Chromas软件打开;

    SQD格式文件——将目标序列(Seq)和测序结果ab1)对比得到的Alignment文件,该文件可以使用DNASTAR 打开;

    PDF 格式文件——质粒图(描述最终获得质粒的大致结构)及QC图。

  • Q:基因合成需求如何下订单?需要提供哪些信息?

    您可以直接将序列发送到金开瑞基因部邮箱order@genecreate.com,或者在我们公司主页: http://www.genecreate.cn上下载订单表格, 填写之后发送到order@genecreate.com邮箱。

    所需要提供的信息包括:

    a. DNA序列或蛋白序列

    b. 基因名称

    c. 如果序列需要优化, 则提供宿主和需要避免的酶切位点信息

    d. 如果需要亚克隆, 则提供目的序列, 亚克隆载体名称和亚克隆方式(酶切信息)信息,及模板测序报告。

    e.如果需要点突变,需要提供突变前后的序列、载体及模板测序报告。

  • Q:金开瑞提供密码子优化服务吗?密码子优化必要性及内容?

    金开瑞拥有专业的非常专业的密码子优化软件,向您提供免费的密码子优化服务。金开瑞密码子优化内容包括:

    1)根据宿主生物的密码子偏好对序列进行密码子优化。

    2)调整优化后序列的GC含量, 使之在一个合适的范围之内。

    3)去除单碱基重复, 单碱基重复是指连续的相同碱基, 如'AAAAAAAAA'. 单碱基重复容易导致质粒的不稳定以及测序信号异常。

    4)根据客户要求, 去除限制性内切酶位点。

    对于用于蛋白表达的基因来说,密码子优化在多数情况下是有必要的。如真核生物的基因需要在原核生物中表达。由于真核生物的密码子偏好和原核生物有很大不同,对基因进行密码子优化将显著提高表达效率。

  • Q:密码子优化过的基因,金开瑞是否还提供蛋白表达或者其他功能实验服务?

    金开瑞包含蛋白表达等多个功能试验部门,选择在金开瑞合成的基因,也可选择在金开瑞做下游功能实验验证,相关部门亦会做相关专业评估。

  • Q:如需基因优化,我需要提供哪些信息?

    若您需要对您的序列进行优化,则需提供如下信息:

    1)被优化的基因序列或者蛋白序列;

    2)优化的宿主;

    3) 基因两端需添加的酶切位点或者基因内部需去除的酶切位点;

    4) 是否需要特定的终止密码子;

    5) 是否需添加Kozak序列,对于哺乳动物系统我们一般建议您添加Kozak序列。

  • Q:基因合成好了,可以免费连到载体上吗?

    1.5k以下的基因合成后,免费克隆到金开瑞标准克隆载体pUC57或其他常规载体上;

    1.5k以上的基因如果是要连其他载体,则需要额外收取亚克隆费用;具体亚克隆费用也是根据合成的序列长度及要构建的载体性质来确定的。

  • Q:为什么直接上目标载体还需要收亚克隆的费用?

    有些亚克隆是需要设计引物并扩增,使目的序列带上酶切位点,然后克隆到载体上。对于有些大的基因,不能直接上目标载体,需要分段上克隆载体再亚克隆到目的载体。对于一些特殊抗性的基因,阳性率低也是需要收亚克隆的费用的。

  • Q:应如何使用金开瑞基因合成交付的质粒及穿刺菌?

    1)质粒使用方法:

    所提供的质粒进行了真空冷冻干燥,干燥后的质粒呈薄膜状或粉末状附在离心管底部,使用前请先离心再小心开启,以免丢失;

    所提供的小抽质粒总量为4 μg,是经过精确定量过的,建议用40 μL灭菌后的双蒸水或10 mM pH8.0 的TE缓冲液来溶解,溶解后的质粒浓度为100 ng/μL。您也可以根据实验需要来溶解质粒。如果加水过多可能会使得质粒跑胶弱,并非提供的质粒量少。

    溶解后的质粒请于-20℃保存,并请避免反复冻融。

    2)穿刺菌使用方法:

    我们同时提供一管穿刺菌备用,宿主菌的名称已经在标签上注明;

    穿刺菌请在4℃保存,保存周期为1个月;

    您可以根据质粒的抗性来进行扩大培养,请用牙签、接种针或枪头在菌丝位置挑取一小块来接种到对应抗性的培养基来扩大培养。

  • Q:与传统PCR克隆相比,基因合成有什么优点?

    基因合成有如下优点:

    • 可以进行密码子优化来提高蛋白的表达量及可溶性,使基因在各种生物表达体系中都能得到良好表达提高;
    • 基因合成获得的基因无突变、准确,普通PCR产生非预期结果的可能性大;
    • 基因合成无需模板,因而不受基因来源限制不需要依赖模板以及酶切位点,构建cDNA文库是费时费钱的。