研究方案

细胞研究

生物学家Wilson预言：“一切生命的关键问题都要到细胞中去找。”。细胞是生物体生长、发育和繁殖的基础。金开瑞组建了专门的细胞研究团队，建立了强大的细胞研究平台，主要包括干细胞研究、CRISPR/Cas9系统基因编辑、细胞功能分析，可为您提供全方位的从方案设计到细胞分离分析、功能研究与CRISPR/Cas9改造等一站式服务。

干细胞研究
CRISPR/Cas9系统基因编辑
细胞功能分析

干细胞是一类具有干性复制和分化能力的多潜能细胞。根据干细胞所处的发育阶段分为胚胎干细胞（embryonic stem cell，ES细胞）和成体干细胞（somatic stem cell）。根据干细胞的发育潜能分为三类：全能干细胞（totipotent stem cell，TSC）、多能干细胞（pluripotent stem cell）和单能干细胞（unipotent stem cell）（专能干细胞）。干细胞（Stem Cell）是一种未充分分化，尚不终化成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体细胞的潜在功能，医学界称为“万用细胞”。干细胞在美容领域、器官移植、疾病治疗、生物修复等领域具有极大的潜在研究价值。

金开瑞致力于干细胞研究，目前对外提供原代细胞分离制作，胚胎干细胞（ES），诱导性多能干细胞（iPSc），间充质干细胞（MSC）构建及培养等类别研究服务。

1、原代细胞制作

胚胎成纤维细胞MEF
小鼠尾尖成纤维细胞Fibroblast
骨髓间充质干细胞MSC
脂肪间充质干细胞ASC
睾丸支持细胞Sertoli
卵巢颗粒细胞
其他类型成体原代细胞

2、iPS诱导性多能干细胞构建（人、鼠）

iPS构建流程图

iPS诱导过程示意图

(引自Loh KM, Lim B. Stem cells: Close encounters with full potential. Nature. 2013 Oct 3;502(7469):41-2)

iPS克隆形态图

（引自Debowski K, Warthemann R, et, al. Non-viral generation of marmoset monkey iPS cells by a six-factor-in-one-vector approach. PLoS One. 2015 Mar 18;10(3):e0118424.）

3、ES/iPS干细胞畸胎瘤实验

畸胎瘤三胚层标记蛋白免疫组化检测图

(引自Debowski K, Warthemann R, et,al. Non-viral generation of marmoset monkey iPS cells by a six-factor-in-one-vector approach. PLoS One. 2015 Mar 18;10(3):e0118424.）

iPS体外分化后进行三胚层标记蛋白免疫荧光检测

(引自Debowski K, Warthemann R, et,al. Non-viral generation of marmoset monkey iPS cells by a six-factor-in-one-vector approach. PLoS One. 2015 Mar 18;10(3):e0118424.)

4、骨髓源性间充质干细胞MSC分离培养

全骨髓培养法：

①用培养基从鼠股骨和胫骨中冲出骨髓

②骨髓细胞接种在培养瓶里

③24－48h后去悬浮，再接下来的每3－4天换液一次，直到需要传代

检测：1 增殖能力检测 2 分化能力检测 3 特异性表面蛋白检测

间充质MSC成骨、软骨和成脂诱导

MSC自我更新和分化示意图

大鼠骨髓间充质干细胞的分离分化鉴定
b.BM细胞和MSC细胞的分群鉴定 d.油红染脂肪细胞的脂滴，成骨细胞被茜素红染色

(引自Hua Z, Liu L, et,al. Mesenchymal Stem Cells Reversed Morphine Tolerance and Opioid-induced Hyperalgesia. Sci Rep. 2016 Aug 24;6:32096.）

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