Pfu DNA聚合酶

Pfu DNA Polymerase是基于嗜热菌Pyrococcus furiosus，在大肠杆菌中重组表达得到的高度热稳定的DNA聚合酶，具有较高的扩增效率和保真性。由于其具备超强的3' - 5' 核酸外切酶活性，外切酶活性使其具有比Taq DNA Polymerase更高的保真性，并且还有着高效的扩增效率，可以到达1kb/10s的速度，同时具有很强的长片扩增能力。 Pfu DNA Polymerase扩增反应产生平末端产物。

【注】:a.引物浓度：一般来说反应体系中引物终浓度为0.2uM即可得到较好的效果。反应性能较差时，可在终浓度0.1uM-1.0uM范围内调整引物浓度。

b.模板浓度：动植物基因组DNA 0.1～1ug，大肠杆菌基因组DNA 10～100 ng，λDNA 0.1～10 ng，质粒DNA 0.1～10 ng。如模板为未稀释cDNA原液，使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10。

c.聚合酶浓度：酶量可在0.25 - 1uL之间调整。通常情况下加大酶量可以提高扩增产量，但有可能会使特异性下降。

d.Mg2+ 和添加剂：大部分PCR反应体系中的Mg2+浓度应在1.0–5.0 mM范围之内，但对于一些扩增困难的样本，例如高GC的DNA样本，可能需要在PCR反应体系中加入添加剂，例如DMSO或甲酰胺等。

【注】:e.退火温度和时间：退火温度需要根据引物的Tm值进行调整，一般设置成低于引物Tm值3 ~ 5℃即可。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。