普通引物

普通引物

  • 次日交付
  • 多种纯化方式
  • 工艺更稳定

服务特色

金开瑞拥有目前主流的Dr.oligo192高通量引物合成仪、专业的技术人员及成熟的合成纯化方法,可提供高质量、多种类的引物合成服务。RPC、PAGE、HPLC等多种纯化方式,保证质量和及时的交货时间,武汉地区次日即可交付。

服务介绍

普通引物是指在PCR反应中作为引导DNA扩增的引物,通常由18-25个碱基组成,可以与目标DNA序列特异性结合,并提供DNA聚合酶催化合成新DNA链所需的3'端。普通引物通常用于常规PCR反应中,包括基因表达分析、病原体检测、基因型鉴定等应用。普通引物的合成和设计非常常见和标准化,通常可以在引物库中找到现成的引物,也可以根据需要定制合成,具有成本低、操作简便等优点。引物合成可用于PCR、测序、全基因合成、亚克隆、点突变、载体构建、RNA干扰和基因重组等实验。根据不同的用途,可选择不同的纯化方式。

服务优势

  • 先进:采用世界上先进的合成仪制造商BLP 公司生产的nm级别的Dr.oligo192高通量DNA合成仪,使引物合成更快速、更安全、更稳定;
  • 快速:3h内可以合成192条30个碱基以内的引物;常规RPC、DSL、OPC纯化引物24h内发货,武汉地区次日即可交付;
  • 安全:采用气相氨解的原理,改进的氨解方式,可以在90min内使引物氨解的更快更完全,并且避免由于其他试剂氨解带来的不必要的突变;
  • 优质:多种纯化方式,多重质量检测手段(HPLC、MS),全面保证我们发货的质量。

服务流程

订单接收
合 成
纯 化
质 检
分 装
质 检
发 货

客户提供

引物合成订购表:需详细填写客户信息、序列、碱基数、纯化方式等信息。

最终交付

  • 对应合成量的引物冻干粉;
  • 引物操作说明书。

服务说明

纯化方式 引物长度 产量(OD)  发货时间
RPC纯化 8-15nt

1-2

1工作日
2-4 1工作日
15-59nt

1-4

1工作日
5-10 1工作日
10-15 1工作日
15-20 1工作日
>20 1工作日
60-120nt 1-2 3工作日
2-5  3工作日
>5  3工作日
PAGE纯化 15-59nt

1-2

3工作日
3-4 3工作日
5-8 3工作日
>8 3工作日
60-80nt  1-2 3工作日
3-4 3工作日
5-8 3工作日
>8 3工作日
80-100nt 3 3工作日
3 3工作日
3 3工作日
>8 3工作日
100-120nt 1 3工作日
2 3工作日
HPLC纯化 8-15nt

1-2

3-5工作日
3-4 3-5工作日
15-59nt 1-4 3-5工作日
5-8 3-5工作日

常见问题与解析 (Q&A)

Q:为什么引物不能退火之后跑胶验证纯度?

两条引物退火成功率达不到百分之百,里面会存在单链引物,引物退火后跑胶有杂链很正常,不能以此来判断单链引物纯度。

Q:基因合成延期怎么办?

基因合成,尤其是难度基因和长片段基因,有可能造成延期,因此我们只能保证绝大多数基因按期交付。对于延期项目,我们的技术支持会给您及时汇报进展。目前并没有任何公司保证延期后减免费用

相关资源

1、引物合成实验中的专属名词及解释

    ● Oligo(Oligonucleotide):Oligo是指短链的寡聚核苷酸,通常由20到200个碱基组成。在引物合成实验中,引物往往是一种特定长度的oligo。

    ● 反向合成(Reverse Synthesis):在引物合成实验中,反向合成指从3'端到5'端逐个加入核苷酸单元,合成引物的过程。

    ● 脱保护(Deprotection):在引物合成中,引物的核苷酸单元通常被保护基团保护,以防止在反应过程中发生意外的化学反应。脱保护是指去除这些保护基团的过程,使得引物的核苷酸单元可用于进一步的化学反应。

    ● HPLC(High-Performance Liquid Chromatography):高效液相色谱法,一种常用的分离和纯化技术,可用于分离和纯化合成的引物。

    ● PAGE(Polyacrylamide Gel Electrophoresis):聚丙烯酰胺凝胶电泳法,一种常用的DNA片段分析技术,可以用于评估引物的纯度和大小。

 

2、引物的保存与使用注意事项

    ● 引物保存的注意事项:

        ▶ 储存温度:将引物储存在干燥的条件下,通常在-20°C或更低的温度下。避免频繁的冻融循环,因为这可能导致引物的降解。

        ▶ 避光保护:引物应储存在避光的条件下,以防止光照引发的降解反应。使用不透明的冷冻管或管盒来保护引物。

        ▶ 防潮防湿:确保引物储存环境干燥,避免湿气的进入。可以使用干燥剂或密封性良好的储存容器来防止湿气侵入。

 

    ● 引物使用的注意事项:

        ▶ 引物质量控制:在使用引物之前,进行引物的质量控制验证,如测序确认引物序列的准确性或质谱分析验证纯度。

        ▶ 合理稀释:根据实验需求,合理稀释引物至适当的工作浓度。确保稀释过程中的准确度和标记清晰度。

        ▶ 正确温度:在实验中,根据引物的要求和扩增反应的最佳温度,严格控制反应温度。避免超过引物的最大耐受温度。

        ▶ 避免污染:使用无菌技术和无菌操作条件,避免引物受到外源性的污染。使用专用的无菌技术器材和操作区域。

        ▶ 单次使用:为避免引物的降解和污染,一次性使用所需量的引物,并避免重复冻融。

 

3、引物合成的实验举例
    ● PCR(聚合酶链式反应):PCR是一种常用的基因扩增技术,引物在PCR反应中用于选择性地扩增目标DNA序列。

    ● 实时定量PCR(qPCR):qPCR用于准确测量目标DNA或RNA的数量,引物在qPCR实验中用于扩增目标序列并进行定量分析。

    ● DNA测序:引物在DNA测序中用于扩增待测序列的片段,以便进行测序反应。

    ● RNA pull-down:RNA pull-down实验用于研究RNA与蛋白质的相互作用。引物在该实验中用于捕获目标RNA分子,并与其结合的蛋白质一起纯化和分析。

    ● 基因突变分析:引物在基因突变分析中用于扩增目标基因的特定区域,以便进行突变检测和分析。

    ● 基因克隆:引物在基因克隆中用于扩增目标基因的特定区域,以便将其插入到表达载体或矢量中。

    ● 限制性片段长度多态性(RFLP)分析:引物在RFLP分析中用于扩增目标基因的特定区域,以便进行限制性酶切并分析不同基因型的片段长度差异。


4、用于引物合成设计、分析和操作的在线工具简介
    ● Primer3 :Primer3常用的在线引物设计工具,可以根据用户提供的目标序列信息,自动设计适合的引物序列,并提供引物参数和特性分析。(primer3.ut.ee)

    ● IDT SciTools :IDT SciTools提供了多个在线工具,包括引物设计、引物分析、序列优化和酶切位点分析等。其中包括了引物设计、Tm值计算、二聚体结构预测等功能。(idtdna.com/pages/tools)

    ● OligoAnalyzer:OligoAnalyzer是IDT提供的在线工具,用于分析引物的理化特性,包括Tm值、二聚体结构、GC含量、末端稳定性等。(idtdna.com/pages/tools/oligoanalyzer)

    ● NCBI Primer-BLAST:NCBI Primer-BLAST是由国家生物技术信息中心(NCBI)提供的在线工具,用于引物设计和特异性分析。它可以设计引物,并对其在基因组中的特异性进行评估。(ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/)

    ● UCSC In-Silico PCR:UCSC In-Silico PCR是UCSC基因组浏览器提供的在线工具,可以通过输入引物序列,在基因组上进行虚拟PCR,并可视化PCR产物的位置。(genome.ucsc.edu/cgi-bin/hgPcr)

    ● SnapGene:SnapGene是一款商业软件,提供了在线版本和桌面版本。它可以用于引物设计、序列编辑、限制性酶切模拟和克隆操作等。在线版本允许用户进行一些基本的引物设计和序列分析操作。(snapgene.com)

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