DNA pull-down试剂盒（植物）

DNA pull down技术是体外研究DNA 与蛋白质互作的有力工具。该技术针对目标区域  设计特异性DNA 探针并经过脱硫生物素标记，脱硫生物素探针可以和偶联在磁珠上的  链霉亲和素亲和结合(Wang,Yu  et  al.2004)。然后，细胞提取物与磁珠-DNA 探针孵育，作用蛋白质分子可以和DNA 探针特异性结合；经过洗涤可以将非特异性结合蛋白质去  除；最后，经洗脱液洗脱，得到目的DNA 探针-蛋白质复合物，再经过Western  Blot或质谱(MS) 鉴定蛋白质类型。其原理图如1.1:

Q:通过pull-down后银染验证发现，没有想要的目的条带?

1)有可能是样品被蛋白酶降解，对应的策略是需要添加蛋白酶抑制剂，所有操作保持 4℃以下冰上操作并防止冻融；

2)有可能是加入生物素标记DNA 量不足，可以增加生 物素标记DNA 量；

3)裂解液盐碱度太高，需用低盐碱度的裂解液；

4)加入细胞裂解液 不够，可以增加细胞裂解量。

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