微量热泳动(MST)

微量热泳动(MST)

  • 免标记
  • 样品量少
  • 快速检测
  • 溶液态接近生理
  • 适用性广

服务特色

MST技术是一种基于温度梯度诱导分子迁移的免标记互作检测方法,可在溶液态、近生理条件下精准测量分子间亲和力。特别适用于小分子药物筛选、蛋白-核酸互作、弱结合体系分析等,兼具高灵敏、快速、样品消耗少等优势,是SPR技术的重要补充与替代选择。

服务介绍

微量热泳动是一种表征生物分子特性的光学方法,是粒子在微观温度梯度中的定向运动。生物分子的质量、电荷、水化层和构象发生改变均可导致分子在温度梯度场中运动速度的变化,这种变化可以用来分析分子间相互作用以及各种化学剂量学参数。将波长为1480 nm 的红外激光照射于荧光激发光路上,通过分色镜照射到毛细管中的样品,样品中的水分子吸收红外光发热而形成温度梯度。MST 仪器通过记录激光器打开前、打开期间和打开后处于温度梯度中的样品内部红外激光照射区域的荧光变化情况,从而实现较短时间的测定。

MST技术无需固定样品、无需标记、在溶液态下完成检测,更接近生理条件,尤其适合难以纯化或易失活的蛋白、膜蛋白、核酸、小分子化合物等体系的互作研究。

服务优势

  • 检测下限低,弱分子力首选
  • 样本量小,且样品无需固定
  • 能够测量复杂混合物(即细胞裂解物、血清、洗涤剂、脂质体)
  • 相互作用物尺寸范围广(离子到MDa复合物)
  • 项目经验丰富,确保数据准确可靠, 快速交付结果!

服务流程

需求对接与合同签订
实验样本准备
方法构建与体系优化
MST检测
数据分析与报告交付

客户提供

a :蛋白推荐干粉,质量>50μg;

b :小分子推荐粉末,质量>1mg;

c :核酸送样量>5 OD;

d :干冰运输足量,出于保存难度,蛋白⼀般不做返样。

服务说明

适用范围:

蛋白质-蛋白质(包括抗原-抗体、分子伴侣-底物)、蛋白质-核酸、核酸-核酸、蛋白-小分子(蛋白酶与抑制剂、细胞膜蛋白活性)、蛋白-肽、肽-肽等相互作用,比ITC能检测更微小的相互作用,可检测任意两种小分子之间的亲和力,其中一个需要有氨基(所有的蛋白都有),带氨基的要纯度高,另一个没有要求。

 

技术对比:

项目 核心优势 蛋白需求量(最低) 小分子需求 核酸送样量 提供参数 适用范围
SPR 检测“金标准”,实时监测结合与解离全过程,无需标记,保持分子天然状态  50ug 1mg 5OD

结合常数KD

(蛋白/核酸)和另一种可以计算摩尔浓度的物质

结合速率常数Ka

解离速率常数Kd

MST 在自由溶液中进行,无需固定、样品消耗少、接近真实生理状态 50ug 1mg 5OD 结合常数KD (蛋白/核酸)和另一种可以计算摩尔浓度的物质
BLI 适合快速筛选与粗样检测 50ug 1mg 5OD

结合常数KD

(蛋白/核酸)和另一种可以计算摩尔浓度的物质

结合速率常数Ka

解离速率常数Kd

nanoITC 直接测量结合热,提供最完整的热力学全景图 300ug 1mg 10OD

结合常数KD

任意两种可计算摩尔浓度的物质

化学计量比n

热力学参数dH,dS

常见问题与解析 (Q&A)

Q:MST检测是否必须标记样品?

不一定。MST支持荧光标记和非标记两种模式:若靶标蛋白自带荧光(如色氨酸荧光)或可特异性标记荧光染料,则无需额外标记配体;若蛋白无荧光,则可选择标记配体(如小分子荧光衍生物)进行反向检测。我们可根据样品特性推荐最佳方案。

Q:细胞裂解液能否直接用于MST检测?

细胞裂解液可以直接用于MST检测。MST技术(微量热泳动技术)具有对复杂样品的兼容性,能够在细胞裂解液等复杂生物溶液中分析分子间的相互作用。只要细胞裂解液中的目标分子(如蛋白)带有合适的荧光标记(例如通过GFP融合表达),就可以直接利用细胞裂解液进行MST实验,无需对蛋白进行纯化。这种方法尤其适用于难以纯化的蛋白或需要在近生理条件下研究分子互作的情况。

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