等温滴定微量热(ITC)

等温滴定微量热(ITC)

  • 无需标记
  • 获得完整热力学参数
  • 高灵敏度
  • 样品可回收

服务特色

ITC技术是直接测量分子相互作用热力学性质的"金标准"方法。通过一次实验即可同时获得结合常数(KD)、结合位点数(n)、焓变(ΔH)、熵变(ΔS)和吉布斯自由能(ΔG)等全套热力学参数,为深入理解分子识别机制、药物设计和优化提供关键数据支撑。

服务介绍

等温滴定微量热(Isothermal Titration Calorimetry, ITC)是一种直接、无需标记的生物物理技术,用于实时监测和量化分子间的相互作用。该技术通过精确测量结合过程中释放或吸收的热量,提供分子相互作用的完整热力学图谱。

ITC能够在接近生理条件下工作,对样品无特殊要求(如固定、标记或修饰),保持分子的天然状态,提供最真实的相互作用数据。一次ITC实验即可同时测定结合亲和力(KD)、化学计量比(n)、焓变(ΔH)和熵变(ΔS),从而计算出吉布斯自由能(ΔG)。

服务优势

  • 通过多维度实验优化,确保数据准确可靠,并支持一对一高效服务, 快速交付结果;
  • 拥有顶尖的分子互作检测平台,配备了Nano ITC等先进设备;
  • 提供全方位配套服务(比如蛋白纯化、SPR、MST BLI等);
  • 不干扰蛋白质和核酸的生理功能,具有非特异性的独特优势,即被研究蛋白质和核酸体系的溶剂性质、光谱性质和电学性质等没有任何限制;
  • 方法灵敏度高,可测的亲和力范围从102-1012/M都可以实现,测量时不需要制成透明溶液;
  • 量热实验完毕的样品未遭破坏,还可以进行后续生化分析。

服务流程

咨询与评估
样品准备
实验优化
ITC检测
数据分析
报告交付

客户提供

1、蛋白推荐干粉,质量>300μg;

2、小分子推荐粉末,质量>1mg;

3、核酸送样量>10OD;

4、干冰运输足量,出于保存难度,蛋⽩⼀般不做返样。

服务说明

适用范围:

蛋白质-蛋白质(包括抗原-抗体、分子伴侣-底物)、蛋白质-核酸、核酸-核酸、核酸-小分子、生物分子-细胞相互作用、酶促反应动力学等,可以检测任意两种小分子之间的结合力,要求检测样品的纯度高。

测试参数:结合常数KD、化学计量比n、热力学参数dH,dS

 

技术对比:

项目 核心优势 蛋白需求量(最低) 小分子需求 核酸送样量 提供参数 适用范围
SPR 检测“金标准”,实时监测结合与解离全过程,无需标记,保持分子天然状态  50ug 1mg 5OD

结合常数KD

(蛋白/核酸)和另一种可以计算摩尔浓度的物质

结合速率常数Ka

解离速率常数Kd

MST 在自由溶液中进行,无需固定、样品消耗少、接近真实生理状态 50ug 1mg 5OD 结合常数KD (蛋白/核酸)和另一种可以计算摩尔浓度的物质
BLI 适合快速筛选与粗样检测 50ug 1mg 5OD

结合常数KD

(蛋白/核酸)和另一种可以计算摩尔浓度的物质

结合速率常数Ka

解离速率常数Kd

nanoITC 直接测量结合热,提供最完整的热力学全景图 300ug 1mg 10OD

结合常数KD

任意两种可计算摩尔浓度的物质

化学计量比n

热力学参数dH,dS

常见问题与解析 (Q&A)

Q:ITC实验对样品有哪些要求?

ITC(等温滴定量热法)实验对样品有以下要求:
1.样品类型与纯度
大分子样品(如蛋白质、核酸等):纯度建议≥90%,可通过SDS-PAGE或SEC-HPLC等方法验证,确保无杂质干扰。
小分子样品:纯度需≥95%,需提供准确的分子量和化学式。
2.样品浓度
大分子浓度:通常为10-100μM,具体需根据预估的解离常数(KD)调整,理想情况下C值(即大分子浓度与KD的比值)介于10-100之间。
小分子浓度:一般为大分子浓度的10-25倍,确保滴定结束时配体过量,以获得完整结合等温线。

Q:ITC可以检测弱相互作用吗?

ITC可以检测弱相互作用,它能直接测量反应体系中放出或吸收的热量,是研究分子间弱相互作用最有效的实验手段之一。

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