Q:ITC实验对样品有哪些要求?
ITC(等温滴定量热法)实验对样品有以下要求:
1.样品类型与纯度
大分子样品(如蛋白质、核酸等):纯度建议≥90%,可通过SDS-PAGE或SEC-HPLC等方法验证,确保无杂质干扰。
小分子样品:纯度需≥95%,需提供准确的分子量和化学式。
2.样品浓度
大分子浓度:通常为10-100μM,具体需根据预估的解离常数(KD)调整,理想情况下C值(即大分子浓度与KD的比值)介于10-100之间。
小分子浓度:一般为大分子浓度的10-25倍,确保滴定结束时配体过量,以获得完整结合等温线。
Q:ITC可以检测弱相互作用吗?
ITC可以检测弱相互作用,它能直接测量反应体系中放出或吸收的热量,是研究分子间弱相互作用最有效的实验手段之一。
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