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Q:类器官培养过程中,提取原代细胞后,红细胞需要去除吗?

肿瘤组织中本身含有(如:肝,肺等组织)大量红细胞。首先,可以在拿到组织后尽量多清洗几次,能够去除大部分的红细胞;其次,可以使用商品化的红细胞裂解液,也可以不做红细胞处理。

Q:类器官的生物学重复如何界定?

传统2D培养为3复孔重复,类器官的生物学重复目前为两种观点:1.按照2D培养方法设置重复孔来进行生物学统计,2.每个类器官可认为是一个独立个体,根据研究目的来设置。按照目前的文献发表和数据支撑,第一种为目前的主流观点。

Q:目前可以通过那些手段辅助鉴别类器官?

目前通用的是明场显微镜和病理染色观察形态;结合基因测序可以鉴定所培养的类器官是否有丢失和供体来源的一致性。

Q:如何避免原代培养中的污染问题?

动物源性的样本一般比人源的更容易污染,尤其是一些胃肠、泌尿系统,培养过程可以添加3-5%庆大霉素或者青链霉素,实验室常用抗真菌试剂。

Q:类器官培养冻存后一般可以传几代?冻存需要有特殊的细胞冻存液吗?

主要看类器官的干性,干性比较好可以传20代以上;冻存液需要类器官专用的无血清冻存液。

Q:类器官株的代数是如何界定的?收到后还能继续传代吗?

我们交付的类器官株通常为P3–P5代,该阶段的类器官遗传特征稳定、干性良好,并已完成多谱系鉴定。收到后,您可参照说明书进行扩增传代;我们承诺,到货后可稳定传代5代以上,足以满足后续药筛或模型构建等实验需求。

Q:类器官株发货时如何保证活性?运输过程中会死亡吗?

冻存株采用专用无血清冻存液,-80°C可长期保存;活体株置于培养基中4°C冷链运输,确保72小时内活性稳定。每批发货前均进行活性抽检,收到后即可直接用于实验。 冻存株采用专用无血清冻存液,于-80°C中保存,发货前经活性抽检,干冰运输,收到后按标准复苏流程操作即可。 活体株置于完全培养基中,4°C冷链运输,确保72小时内送达且活性稳定。发货前进行活性抽检。收到后建议先更换新鲜培养基,于培养箱中恢复培养24小时后再用于实验,以保证最佳实验效果。

Q:什么是类器官?

类器官(Organoids)是器官特异性细胞类型的3D细胞集合,这些细胞从干细胞或器官祖细胞发育而来,并能以与体内相似的方式经细胞分序(cell sorting out) 和空间限制性的系别分化而实现自我组建。类器官满足以下特点: 1. 必须要有不同的细胞类型; 2. 表现出器官特有的一些功能; 3. 组成应该和器官相似

Q:在没有新鲜组织的情况下,可以用冻存组织提取的原代细胞进行3D培养吗?

文献虽有报道可以冻存组织进行2D或者3D培养,成功率较低,特别是对类器官的培养对细胞活性要求相对较高,不建议组织冻存后进行类器官培养。

Q:类器官培养2-3天直径可以达到多少,最大体积可为多少?

主要看类器官生长的情况,一般是100-200um.如果类器官初始体积就比较大,直径会更大一些,目前类器官的大小可达到4-5mm

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