表观遗传

表观遗传

  • ChIP-seq
  • CUT&TAG
  • ATAC-seq

服务特色

采用ChIP-seq CUT&TAG ATAC-seq等最新技术,突破传统检测的灵敏度与分辨率限制,确保数据产出兼具广度与深度;针对客户在基础科研、转化医学及产业开发中的差异化需求,提供从实验设计、样本处理到数据深度挖掘的一站式服务,尤其擅长复杂疾病、肿瘤免疫、发育生物学等领域的表观遗传机制解析。

服务介绍

提供高精度、多维度的表观遗传学解决方案,以前沿技术赋能生命科学探索与转化应用。以深度解析基因表达调控机制为核心,依托国际领先的测序平台、自主研发的生物信息分析体系及跨学科专家团队,从DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质开放性到非编码RNA调控等全维度构建表观遗传图谱,助力客户精准解析疾病机制、挖掘生物标志物、优化药物靶点筛选及个性化医疗方案设计。

常见问题

Q:ChIP-Seq中的测序DNA样本需要多少产量?

通常是≥10ng。随着目前建库技术的不断完善,低至5ng的DNA量也能被建库成功;少数测序公司为了降低自身风险提出20ng的要求,通过可以协商降低该送样要求。尤其是一些转录因子,最终能够捕获的DNA量会很低。

Q:ChIP-Seq中的测序DNA样本需要多少产量?

通常是≥10ng。随着目前建库技术的不断完善,低至5ng的DNA量也能被建库成功;少数测序公司为了降低自身风险提出20ng的要求,通过可以协商降低该送样要求。尤其是一些转录因子,最终能够捕获的DNA量会很低。

Q:样品制备过程中是否需要PCR扩增?PCR扩增后是否会影响最后的结果?还有哪些因素会影响ChIP-Seq的结果?

如果ChIP下来的DNA样品量非常少,在样品制备过程中通常需要经过一步PCR扩增的过程,PCR扩增主要是为了获得足够上机反应的DNA量。如果客户能够提供足够量的DNA样品,那就不需要再进行PCR扩增。由于是线性扩增,扩增前后的结果很相似,基本上不会影响测序结果。抗体的质量,特异性,ChIP的实验操作,实验设计方法,DNA片段长度范围,测序通量和质量等都会影响ChIP-Seq的结果。

Q:导致ChIP-seq测序假阳性比较高的原因有哪些?

(1)染色质开放程度的不均一性、DNA打碎方法、PCR扩增偏向性、基因组的重复程度以及测序和序列比对过程中的错误都会引入系统误差造成假阳性,测序后首先将序列比对到已知基因组上并确立真正的结合位点。 (2)对于转录因子,要寻找“峰”对应的下游调控基因(靶基因),或者构建转录因子结合位点的保守结合序列,如果转录因子的motif是已知的,则可以计算“峰”序列中包含motif序列的百分比,间接估计实验结果的可靠性。

Q:CUT&Tag适用于什么物种? 有什么要求?

适用于常规哺乳动物细胞的蛋白质-DNA互作研究,酵母、植物等细胞可以经过特殊的处理(破除细胞壁或者提取细胞核)来进行实验。分析的时候应该保证该物种有参考基因组,且注释完整,如果需要联合分析,应保证组学基因组和样本命名一致。而细菌样本不适合做CUT&Tag,因为有一层细胞壁,不能直接与Con A beads结合,且细菌没有完整的核结构,因此无法开展此项实验。

Q:CUT&Tag是否可以应用于异染色质上的位点研究或是低丰度的转录因子研究?

CUT&Tag能在异染色质区域检测到组蛋白修饰和结合蛋白,常用于研究异染色质相关的组蛋白修饰,如H3K27me3和H3K9me3。除此之外,它对低丰度转录因子的检测效果优于ChIP-seq,所需细胞量更少,即使这些因子在基因组中的结合位点较少也能精确识别转录因子的结合位点。

Q:ATAC-seq与ChIP-seq等其他表观遗传方法相比如何?

ATAC-seq能够捕获所有的开放染色质区域,而不仅仅是那些与特定因子结合的区域,它能够寻找样本内的表观遗传变化。对于具有已知序列结合基序的蛋白质,可以逐个细胞地识别在开放染色质中富集到哪些基序。

Q:ATAC-seq可以使用冷冻样本吗?

冷冻细胞:需解冻后立即裂解,分离细胞核(冻存可能导致核膜损伤,需优化裂解时间)。 组织样本:需机械/酶解离后过滤去除碎片,通过蔗糖梯度离心纯化细胞核。

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