双荧光素酶报告系统

双荧光素酶报告系统

  • 检测周期短
  • 性价比高
  • 稳定性好
  • 准时交付

服务特色

金开瑞应用Promega公司的双荧光素酶报告基因检测(DLR)系统,提供DLR检测服务。

服务介绍

双荧光素酶检测是转录调控研究中十分重要的实验手段,主要应用于启动子和转录因子,以及miRNA和其靶基因互作的验证。

在双荧光素酶检测中,将萤火虫荧光素酶作为实验报告基因,海肾荧光素酶作为对照报告基因。实验报告基因用于测试实验条件下基因的表达,而对照报告基因作为内对照。

以荧光素为底物来检测萤火虫荧光素酶活性,荧光素酶可以催化荧光素,在荧光素氧化的过程中会发出生物荧光,然后通过化学发光仪测定。

服务优势

  • 灵敏度高:比Western blot灵敏度高1000倍以上
  • 无报告基因: 植物、哺乳动物中无报告基因内源性表达
  • 不受物质影响:荧光素酶检测不受细胞内其它物质影响
  • 检测方便/范围广:检测范围广,大于7个数量级

服务流程

序列评估、靶点预测
基因合成
载体构建
细胞转染
双荧光素酶实验
数据分析

客户提供

基因模板,需提供详细的转录因子、目的基因、或microRNA信息;

实验细胞,如无特殊要求,金开瑞默认为使用293T细胞,则无需提供。

最终交付

  • 实验流程及完整报告一份,包括实验原始数据、图片、分析结果等。

服务说明

服务项目 服务周期(工作日)
基因合成 15-20
载体构建与提取
双荧光素酶报告基因(含转染+细胞培养+荧光素酶检测) 10(4组,超过4组适当增加周期)

案例展示

相关资源

1、在双荧光素酶报告系统研究中,一些常用网站、数据库和资源库的简介

    ● Promega(promega.com):Promega是一个提供生命科学研究相关产品和服务的公司。他们提供多种荧光素酶底物和相关试剂盒,供科研人员在双荧光素酶报告系统实验中使用。

    ● Addgene(addgene.org):Addgene是一个非营利性的生物资源库,提供了广泛的质粒和表达载体,包括荧光素酶相关的质粒,供研究人员用于基因转染和表达。

    ● NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov):NCBI(美国国家生物技术信息中心)提供了包括PubMed、GenBank、Gene等在内的多个数据库,可用于搜索和获取与双荧光素酶报告系统相关的文献、基因序列和蛋白质信息。

    ● PubChem(pubchem.ncbi.nlm.nih.gov):PubChem是NCBI的一个化学物质数据库,提供了大量的化合物信息和相关的生物活性数据,可以用于荧光素酶底物的筛选和选择。

 

2、双荧光素酶报告系统的实验步骤简介

①细胞培养和处理:

    ● 准备和处理目标细胞,确保其在适当的生长状态下进行实验。
    ● 维持适当的培养条件,包括培养基成分、温度和湿度等。

 

②底物处理:

    ● 加入荧光素酶底物和葡萄糖氧化酶底物以触发荧光发光反应。
    ● 优化底物浓度,确保使用浓度适当,以获得稳定且可检测的荧光信号。

 

③信号检测:

    ● 使用合适的设备进行荧光或发光信号的检测。
    ● 选择适当的检测方法,如荧光成像仪、荧光分析仪或酶标仪。 

 

④数据分析:

    ● 进行相对荧光单位的定量分析,并设置负对照和正对照组。
    ● 使用合适的数据分析方法,评估实验结果的特异性和可靠性。

 

⑤实验重复和统计显著性:

    ● 进行足够的实验重复以确保结果的可靠性。
    ● 根据需要进行统计学分析,以评估数据的显著性和可靠性。

 

⑥实验条件控制:

    ● 保持实验条件的一致性,包括细胞培养条件、培养基配制、底物制备等。
    ● 严格控制实验的时间点和温度,确保实验操作在合适的时间窗口内进行。

 

⑦数据报告和结果解释:

    ● 撰写实验报告或论文,清晰地呈现数据和结果。
    ● 结合相关背景知识和文献,解释实验结果的意义和可能的机制。

 

3、除了双荧光素酶报告系统实验,还有哪些常用于研究基因表达调控和信号通路活性的实验方法?

① 免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP):

    ▶ 使用特异性抗体将目标蛋白与其相互作用的分子(如蛋白质复合物或DNA序列)结合,并通过沉淀、洗涤和分析来鉴定和定量这些相互作用。

 

② 染色质免疫沉淀(ChIP,ChIP-seq):

    ▶ 利用特异性抗体将某个蛋白质与染色质中的靶标位点结合,并通过免疫沉淀和测序技术,鉴定和分析该蛋白质在基因组上的结合位点及其调控作用。

 

③ 蛋白质互作分析:

    ▶ 利用蛋白质交联、共沉淀和质谱分析等技术,鉴定和分析蛋白质之间的相互作用关系,从而揭示基因表达调控和信号通路中的蛋白质网络。

 

④ 基因组学和转录组学分析:

    ▶ 利用高通量测序技术,如RNA-seq、ChIP-seq和ATAC-seq等,全面分析基因表达、染色质状态和转录因子结合位点,揭示基因调控网络和信号通路的动态变化。

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