外泌体提取和鉴定

外泌体提取和鉴定

  • 外泌体提取
  • 外泌体鉴定
  • 植物外泌体
  • 动物外泌体

服务特色

外泌体提取和鉴定技术广泛应用于生物医药研究领域,包括了解细胞间通讯机制、研究疾病的发病机制、发现生物标志物、开发新型药物传递系统等。金开瑞提供从外泌体提取、鉴定,到功能验证的一站式服务。在外泌体提取,尤其是植物外泌体提取方面具有丰富经验。

服务介绍

外泌体提取和鉴定是一种实验技术,用于从生物样本中分离和分析外泌体。外泌体是细胞释放的小型囊泡,携带有脂质、蛋白质、核酸等生物分子。提取过程通过特定处理步骤将外泌体从样本中纯化出来,而鉴定过程则利用多种方法对外泌体进行分析,包括形态学观察和分子分析。外泌体提取和鉴定技术被广泛应用于生物医药研究,有助于了解细胞间通讯、研究疾病机制、发现生物标志物等。

外泌体(exosome),特指直径在40-100nm的盘状囊泡。其主要来源于细胞内内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。现已证实可以分泌外泌体的细胞有:肥大细胞、淋巴细胞、树突状细胞、肿瘤细胞、间充质干细胞等。

外泌体在免疫中抗原呈递、肿瘤的生长与迁移、组织损伤的修复等生理病理上起着重要的作用。同时,不同细胞分泌的外泌体具有不用的组成成分和功能,可作为疾病诊断的生物标志物。

服务优势

  • 先进技术:应用先进的提取和鉴定技术,确保高效、可靠的服务。
  • 高质量数据:专业团队进行准确分析和解读,提供可靠的结果和报告。
  • 个性化方案:根据客户需求提供定制化解决方案,紧密配合研究项目。
  • 保密与可靠性:严格保护客户样品和数据信息,提供安全可靠的服务。
  • 快速交付:高效的实验流程和操作经验,及时交付结果,满足时间要求。

服务流程

样本获取
外泌体提取
鉴定
WB、qPCR
标记示踪
功能验证

客户提供

血清、血浆、唾液、尿液等体液、细胞上清、植物样品等其它特殊样品


样品送样要求:

1、血清:使用无添加剂采血管采血;使用RNase-free的离心管;送样量>4ml

2、血浆:不可使用肝素抗凝;溶血样本不建议使用,及时处理,避免剧烈晃动;送样量>4ml

3、细胞上清:使用无外泌体血清培养;离心去除细胞碎片;防支原体等微生物污染;送样量>20ml

4、植物样本:植物组织

最终交付

  • 外泌体粒径、浓度检测报告
  • WB检测结果
  • q-PCR相关检测结果
  • 电镜图片
  • NGS测序结题报告
  • 蛋白组学结题报告
  • 特殊服务:外泌体整体方案设计探讨
  • (根据具体项目确定交付)

服务说明

外泌体服务服务项目 周期(工作日)
外泌体提取

血清/血浆

15-20 个工作日  (含粒径、电镜时间)
细胞培养上清 15-20 个工作日  (含粒径、电镜时间)
植物外泌体(提取成功过) 15-20 个工作日  (含粒径、电镜时间) 提取不成功,不收费
植物外泌体(首次提取) 15-20 个工作日  (含粒径、电镜时间) 提取不成功,不收费
Nanosight 粒径检测 15-20 个工作日  (含粒径、电镜时间)
透射电镜检测(3张图) 15-20 个工作日  (含粒径、电镜时间)
外泌体流式细胞术 15-20 个工作日  (含粒径、电镜时间)
外泌体wb(CD9、CD63、CD81、TSG101中的指标) 15-20个工作日 (含粒径、电镜时间)
PKH26外泌体染色 10个工作日
外泌体miRNA测序 25个工作日
外泌体在小鼠体内的三维离体成像 商议
外泌体工程化改造 商议

案例展示

相关资源

1、一些常见的外泌体提取方法的优劣对比

提取方法

概念

优势

劣势

超速离心法 利用离心力将外泌体从生物样本中分离出来

相对简单、常用;可适用于大多数样本类型;

适用于大规模提取

需要多次离心步骤;

易受到细胞碎片和蛋白质污染

超滤法 通过滤膜筛选外泌体,根据大小分离 快速、高效;适用于大样本体积 大分子物质与外泌体的分离效果可能不理想
密度梯度离心法 利用密度梯度离心介质,根据密度差异纯化外泌体 提取纯度较高;适用于小样本量

操作复杂,耗时较长;

对离心速度和时间要求较高

免疫沉淀法 利用特定抗体与外泌体表面标记分子的相互作用进行提取 特异性高,可用于纯化特定标记的外泌体

需要有特异性抗体;

提取纯度可能受到抗体效能的影响

多步骤联合方法

结合多个提取方法的优点,

利用不同步骤提高提取纯度和产量

提取效果综合优于单一方法;适用于复杂样本

操作复杂,耗时较长;

可能会引入额外的污染或失去部分样本

 

2、外泌体研究的常见思路

    ● 外泌体生物学特性研究:了解外泌体的起源、形成机制、分泌调控以及其在细胞间的传递方式和动态变化。这个思路可以通过细胞培养、分离和纯化外泌体、使用显微镜观察外泌体形态学特征、分析外泌体的成分和分子组成等来探索。

    ● 外泌体功能研究:研究外泌体在细胞间的信息传递、信号调控、基因转移、免疫调节等方面的功能。可以通过外泌体与接受者细胞的共培养实验、外泌体摄取实验、功能分析等方法来揭示外泌体的功能机制。

    ● 外泌体在疾病中的作用研究:探索外泌体在不同疾病发生、发展和转移过程中的作用机制,如癌症、心血管疾病、神经退行性疾病等。可以通过临床样本分析、动物模型研究、体外实验等方法来研究外泌体在疾病中的作用和潜在应用。

    ● 外泌体作为生物标志物的研究:寻找外泌体中特定分子、蛋白质、核酸等作为生物标志物,用于疾病的诊断、预后评估和治疗监测等临床应用。可以通过分子标记和成分分析、临床样本分析等方法来研究外泌体作为生物标志物的潜力。

    ● 外泌体工程研究:利用基因工程和纳米技术等方法,改变外泌体的产生、组成和功能,以实现药物递送、基因治疗和再生医学等方面的应用。可以通过外泌体工程和功能研究相结合的方法来探索外泌体在医学领域的应用前景。

    这些思路可以相互交叉和结合,根据具体的研究目的和问题,选择合适的研究方法和实验设计,从不同角度深入研究外泌体的生物学特性和功能,以及其在疾病诊断和治疗中的潜在应用。


3、外泌体研究中一些常用的数据库和资源库

    ● ExoCarta:ExoCarta是一个广泛被引用的外泌体数据库,收集了来自不同物种和细胞类型的外泌体相关数据,包括外泌体蛋白质、miRNA和脂质等成分的信息。

    ● EVpedia:EVpedia是一个综合性的外泌体数据库,提供了外泌体相关的蛋白质、miRNA、脂质等分子组成信息,并提供了相应的注释、实验方法和参考文献。

    ● Vesiclepedia:Vesiclepedia是一个外泌体和细胞外囊泡相关的数据库,提供了来自多个物种的外泌体和囊泡的蛋白质组学数据,帮助研究者进行外泌体的研究和分析。

    ● miRBase:miRBase是一个全面收集整理miRNA序列和注释信息的数据库,研究者可以在该数据库中查询和下载与外泌体相关的miRNA信息。

    ● GEO(Gene Expression Omnibus):GEO是一个公共基因表达数据的数据库,研究者可以在其中找到与外泌体相关的转录组数据集,用于进一步分析和挖掘外泌体的功能和调控网络。

    ● TCGA(The Cancer Genome Atlas):TCGA是一个癌症基因组学数据的资源库,其中包含了大量癌症患者的临床数据、转录组数据和蛋白质组数据等,研究者可以在其中寻找与外泌体相关的癌症数据。

    ● PubMed:PubMed是一个生物医学文献数据库,其中包含了丰富的外泌体研究相关的科学论文和综述文章,研究者可以在其中查找最新的外泌体研究进展和相关文献。

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