专业酵母双杂交技术服务

金开瑞提供高质量酵母双杂交服务,拥有齐全cDNA文库,10年经验团队,高效筛选与诱饵蛋白存在特异相互作用的蛋白

我们的服务优势

金开瑞酵母双杂交技术平台的核心竞争力

齐全cDNA文库

拥有较齐全的cDNA文库,确保筛选出与诱饵蛋白存在特异相互作用的蛋白

10年专业经验

由10年从事酵母表达操作的实验员组成,确保实验高效准确

优化升级载体

创新的三框文库构建方法,可保证片段长度、阳性率和文库滴度等信息的一致性。

高成功率保障

一站式辅助检测手段,多重验证确保实验结论可靠

酵母双杂交服务实验流程优化

高效、可靠的蛋白质互作检测系统

实验设计
载体构建
酵母转化
筛选验证
互作验证
数据分析
1

实验设计

设计诱饵蛋白(Bait)和猎物蛋白(Prey)的表达载体,选择合适的酵母菌株和报告基因系统。确定筛选条件和对照实验方案。

  • 选择合适的载体系统(pGBKT7/pGADT7)
  • 设计特异性引物进行PCR扩增
  • 确定自激活检测方案
  • 设置阳性和阴性对照
2

载体构建

将目标基因克隆到诱饵和猎物载体中,进行测序验证,确保读码框正确,无突变发生。

  • PCR扩增目标基因片段
  • 限制性内切酶酶切与连接
  • 转化大肠杆菌进行扩增
  • 质粒提取与测序验证
3

酵母转化

使用LiAc/PEG方法将构建好的诱饵载体和猎物载体共转化到酵母感受态细胞中。

  • 制备酵母感受态细胞
  • 诱饵载体单独转化(自激活检测)
  • 诱饵与猎物载体共转化
  • 涂布在选择性培养基上培养
4

筛选验证

在四缺培养基(SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade)上进行筛选,并通过β-半乳糖苷酶活性检测验证阳性克隆。

  • 双缺培养基初筛(SD/-Leu/-Trp)
  • 四缺培养基复筛(SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade)
  • X-α-gal显色反应验证
  • 3-AT浓度优化抑制背景生长
5

互作验证

对阳性克隆进行验证实验,排除假阳性结果,确保蛋白质互作的特异性。

  • 回转实验验证互作特异性
  • 一对一互作验证
  • 点对点验证实验
  • 免疫共沉淀辅助验证
6

数据分析

对实验结果进行系统分析,构建互作网络,提供详细的实验报告。

  • 阳性克隆测序分析
  • 互作强度定量分析
  • 构建蛋白质互作网络
  • 生物信息学功能分析

服务类型对比

根据您的需求选择最合适的服务类型

服务项目 应用 互补实验 周期
酵母杂交文库构建 酵母杂交筛选 - 4-6周
核酵母双杂交筛选 获得与已知蛋白互作的未知蛋白 COIP,GST pulldown 6-8周
膜酵母双杂交筛选 研究膜蛋白之间的互作 COIP,GST pulldown 8-10周
酵母单/双杂交验证 已知蛋白与蛋白/启动子之间的互作 EMSA,双荧光素酶等 4-5周
服务项目 客户提供 最终交付
文库构建 组织/细胞 滴度在1×10cfu/mL以上的酵母文库菌液;文库PCR鉴定结果图片(阳性率在90%左右)
文库筛选 蛋白序列/基因序列/质粒 筛选过程中的全部原始图片;筛选获得所有相互作用的猎物蛋白的测序结果

常见问题

关于酵母双杂交服务的疑问解答

酵母双杂交技术适合研究哪些类型的蛋白?

酵母双杂交技术特别适合研究核蛋白和膜蛋白的相互作用。对于核蛋白,我们使用经典酵母双杂交系统;对于膜蛋白,则采用分离的泛素系统(split-ubiquitin)技术。此外,我们还提供针对不同亚细胞定位蛋白的定制化服务方案。

实验需要提供什么样品?

根据服务类型不同,所需样品有所区别:

  • 文库构建:需提供组织或细胞样本
  • 文库筛选:需提供蛋白序列/基因序列/质粒
  • 验证服务:需提供诱饵和猎物重组质粒

我们的技术支持团队会在项目启动前提供详细的样品准备指南。

实验周期需要多长时间?

标准服务周期如下:

  • 文库构建:4-5周
  • 核酵母双杂交筛选:6-8周
  • 膜酵母双杂交筛选:8-10周
  • 酵母单/双杂交验证:4-5周

具体时间会根据项目复杂程度有所调整,加急服务可缩短30%时间。

如何保证实验结果的可靠性?

我们采用多重质控确保结果可靠:

  • 严格的自激活及毒性验证
  • 三重复实验设计
  • 阳性/阴性对照设置
  • 结果通过CO-IP或GST pulldown互补验证
  • 提供原始实验数据供客户查验

开始您的酵母双杂交研究

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