重组蛋白在大肠杆菌中大量表达时，很容易在胞内形成不可溶的包涵体，为后期的纯化复性带来麻烦。而且，复性所得到的蛋白活性很低甚至没有活性。因此，提高重组蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达是十分必要的。 可以从以下几点进行优化： 1) 选择合适的宿主细胞； 2) 采用合适的融合标签表达； 3) 选择合适的质粒载体； 4) 优化培养诱导条件。

重组蛋白在大肠杆菌中表达很难准确折叠的主要原因是大肠杆菌的细胞质环境呈现还原性，不利于二硫键的形成。针对这一原因，研究人员对细胞内表达，主要还原途径的两个关键酶的基因进行突变。构建了有利于二硫键形成，蛋白准确折叠的感受态细胞。如origami（DE3）,origamiB（DE3）,Rosetta-gami（DE3）,shuffle等。

融合标签用于检测和纯化目的蛋白。有时也通过增加目的蛋白在细胞质中的可溶性或帮助将目的蛋白转运到细胞周质中以提高目的蛋白的生物活性。在原核表达载体或蛋白序列中常添加一些可溶性标签，如GST、MBP、SUMO等。这些标签在宿主中表达的蛋白质会有高度的可溶性。在与外源蛋白质融合后，从而促进外源蛋白的可溶性表达。

影响原核表达的因素包括有：翻译起始位点、GC含量、mRNA二级结构、密码子的偏爱性、质粒载体的选择、基因或者蛋白的大小、外源基因对宿主有毒性、基因突变（移码突变）、培养诱导条件等。

1) 翻译后的修饰（post-translational modification）如磷酸化，糖基化均能增大分子量； 2) 翻译后蛋白的自我切割（post-translation cleavage）自身断裂会降低分子量； 3) 有的蛋白有好几种异构体（splice variants），每个异构体的分子量都不一样，注意区分； 4) 自身所带电荷量有关（the composition of amino acids (charged vs non-charged)）； 5) 多聚体（multimers -）会增大分子量。

您可以选择液态形式或者冻干粉形式发货，蛋白冻干需要收取一定的费用。冻干粉采用去离子无菌水复溶，完全溶解即可，具体浓度根据您的实验需求而定。

载体（vector），指在基因工程重组DNA技术中将DNA片段（目的基因）转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。三种最常用的载体是细菌质粒、噬菌体和动植物病毒。载体的种类与宿主相匹配，根据宿主不同，分为原核（细菌）表达载体、酵母表达载体、植物表达载体、哺乳动物表达载体、昆虫表达载体等。载体中含有外源基因片段。通过载体介导，外源基因可以在宿主中表达。金开瑞主要是原核表达载体。

（1）目的基因获取 （2）质粒构建 （3）菌株筛选 （4）表达条件优化 （5）蛋白纯化

A 测序结果，包括序列和测序峰图片； B 质粒载体名称；C重组克隆质粒10ul或者表达质粒20ul浓度大于100ng/ml； D 质粒抗性； E克隆和测序的引物序列。