T5核酸外切酶（T5 Exonuclease）

T5 核酸外切酶沿 5’→3方向降解 DNA。既能从 5’末端起始消化，也能从线性或环状双链 DNA 的切刻或缺口处起始消化，但不能降解超螺旋双链 DNA。T5 核酸外切酶还具有单链 DNA 核酸内切酶活性。降解碱裂解质粒提取方法中产生的变性 DNA，提高 DNA 克隆效率。

产品特点
无核酸外切酶和核酸内切酶残留；
稳定性好；
加入EDTA至终浓度为至少11mM或含有SDS的DNA loading buffer (SDS的最终浓度为0.08%)可使T5 Exonuclease失活；
 

产品应用
T5 Exonuclease常被用于Gibson组装(Gibson Assembly)

T5核酸外切酶，是一种按照5'→3'方向降解双链或单链DNA的核酸外切酶。既能从单链或双链DNA 5'末端起始消化，也可以从线性或环状双链DNA的缺口(gap)或缺刻(nick)处起始消化。T5 Exonuclease无法降解超螺旋双链DNA，并且其降解单链DNA的活性可以通过将反应缓冲液中的Mg2+降低到低于1mM而进行抑制。基于以上特性，T5 Exonuclease常被用于Gibson组装(Gibson Assembly)。

Gibson组装：在恒温条件下，有效连接带有多个重叠序列片段的技术，其基本原理可以概括为三步：(1) T5核酸外切酶从DNA片段的5'末端开始消化，产生互补的单链3'末端(overhangs)，促使互补的末端退火；(2) DNA聚合酶填补退火片段的缺口(gaps)；(3) DNA连接酶将组装后的切刻(nicks)处进行连接，最后得到一个完整的双链DNA。

T5核酸外切酶失活或抑制：加入EDTA至终浓度为至少11mM或含有SDS的DNA loading buffer (SDS的最终浓度为0.08%)可使T5 Exonuclease失活。

1.参考下表在冰浴中设置反应体系：

注：T5 Exonuclease应最后加入反应体系中，并且加入前须注意混匀反应体系；使用时宜存放在冰盒内或冰浴上。

2.适当混匀反应体系，低速离心以沉淀液体至管底。 
3.反应条件：37ºC孵育10-30min。
4.终止反应：反应结束后立即冰浴并加入EDTA至终浓度为11mM以终止反应。

注意事项
1、T5 Exonuclease是一种对于DNA底物有选择性的核酸外切酶，其对不同的DNA底物显示出不同的反应活性。因此，消化特定的底物时，须注意适当控制好酶量和反应时间；
2、T5 Exonuclease的最佳反应温度为37℃，但是在50℃也具有一定活性，因此可用于Gibson组装。
3、T5 Exonuclease在普通PCR buffer中也具有活性。