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服务简介

酵母表达系统是一种最经济高效的真核蛋白表达系统,可以成功实现胞内表达或是分泌表达,且其放大培养基相对廉价,培养条件要求不高,适宜工业放大。与哺乳动物细胞表达系统一样,酵母蛋白表达系统能够对所表达蛋白进行例如糖基化、酰基化、脂基化、磷酸基化等保证蛋白天然构象的修饰,可用于制备非常接近天然蛋白的具有高附加值的蛋白原料。

武汉金开瑞生物工程有限公司的酵母蛋白表达平台由多年从事酵母表达操作的实验人员组成,经验丰富,采用自行改造的高效分泌载体和宿主组合,可在最大程度上实现最高质量的蛋白表达。经客户反馈,以我平台所制备的蛋白原料为抗原所制备的单抗均具有很好的识别天然蛋白的优良特性。

点击这里查看如何选择合适的蛋白表达系统

服务流程
方案沟通
 
接收订单
 
质粒构建
 
蛋白表达
 
蛋白纯化
 
成果交付
客户提供

目的蛋白信息或基因序列,质粒(也可以选择由金开瑞提供);

蛋白询价信息表(请点击下载中心,下载蛋白询价信息表后详细填写)。

最终交付

纯化后蛋白纯品、表达菌株(收费);

蛋白表达结题报告,包括测序报告、实验条件、蛋白表达纯化检测结果。

服务说明
服务名称 服务项目 服务内容 交付结果 服务周期
酵母细胞表达服务经济型套餐 原核克隆 基因的获得 核酸电泳图片 2周
PCR扩增产物酶切连接到合适的载体
转化DH5α
重组质粒大量制备
线性化重组质粒
优化表达 电转化适宜的酵母宿主 酵母核酸电泳图 2-3周
随机挑10株单菌落进行PCR鉴定
表达及纯化 从PCR鉴定阳性菌落中选取一株做1L体系的放大表达 最终纯化产物SDS-PAGE及WB 1-2周
发酵液上清处理及一步纯化
纯化产物SDS-PAGE及Western Blot 1 L上清的纯化产物
酵母细胞表达服务标准型套餐 原核克隆 基因的获得 核酸电泳图片 2周
PCR扩增产物酶切连接到合适的载体
转化DH5α
重组质粒大量制备
线性化重组质粒
优化表达 电转化适宜的酵母宿主 酵母核酸电泳图 5-6周
用遗传霉素G418进行多拷贝子筛选
对多拷贝子克隆进行RCR鉴定
选取40株多拷贝子进行小量诱导表达 最终种子表达上清SDS-PAGE图
表达及纯化 选取表达情况最好的,根据客户需要放大表达 最终纯化产物SDS-PAGE及WB 1-2周
发酵液上清处理及一步纯化
纯化产物SDS-PAGE及WB 1L上清的纯化产物
Biobrick专利技术用于酵母工业菌种改良优化 原核克隆 基因的获得 核酸电泳图片 2周
PCR扩增产物酶切连接到合适的载体
转化DH5α
重组质粒大量制备
Biobrick专利技术体外梯度构建多拷贝基因剂量
优化表达 线性化重组质粒 酵母核酸电泳图 5-6周
电转化适宜的酵母宿主
对多拷贝子克隆进行RCR鉴定
选取40株多拷贝子进行小量诱导表达 最终种子表达上清SDS-PAGE图
表达及纯化 选取表达情况最好的,根据客户需要放大表达 最终纯化产物SDS-PAGE及WB 1-2周
发酵液上清处理及一步纯化
纯化产物SDS-PAGE及WB 客户要求的蛋白表达量
案例展示

案例1:经济型套餐

以下是通过我平台自行改造的pPIC9K载体和GS115宿主系统成功表达一种酶的经济型套餐实例。自接到订单至成功表达只用了20个工作日,亲和层析一步纯化得到蛋白纯度在95%以上。

Fig. A: Expression and secretion of enzyme protein from P.pastoris
Lane 1: Total protein of recombinant clone
Fig. B: Purification of the target enzyme protein
Lane 1: Purified enzyme protein

案例2:标准型套餐

以下是一个需要做优化表达的标准型订单服务,客户要求表达一种药用蛋白,最后做工艺放大,对表达量有一定的要求,客户自己做了大量的工作仍未提高表达量,我们从上游开始进行表达优化,历经50个工作日,用我平台自己改造的pPIC9K载体和KM71H宿主在2.5 mg/mL的G418浓度下获得一株令客户满意的工艺放大种子。

Fig C: Expression and secretion of pharmaceutical protein from P.pastoris
Lane 1: Expression level from customer
Lane 2: Expression level from Genecreate
Lane 3: Negative control
Fig. D: Purification of the target pharmaceutical protein by SP-Sepharose
Lane 1: Purified enzyme protein

案例3:

以下是我平台成功完成的一个工业酶菌种对产量的优化提高工作,利用Biobrick专利技术由单拷贝基因剂量构建到8拷贝的基因剂量,历经近60个工作日,将酶的表达量由开始的0.5 g/L的水平提高到2.4 g/L的水平,提高了近5倍。

Fig. E: single copy gene expression of industrial enzyme from P.pastoris
Lane 1: Expression level from single copy gene expression
Fig. F: eight copy gene expression of industrial enzyme from P.pastoris
Lane 1: Expression level from eight copy gene expression

备注:我们只提供抗HIS标签抗体用于表达产物的质控,客户要求用对应蛋白的抗体做western blot,则抗体由客户自行提供。

专利的Biobrick技术是集蛋白的高效表达和高活性于一体的新技术,以下是我们成功为一家知名公司开发的诊断试剂原料,经客户同意,我们公开下列数据:

N1 122 P1 19523 S1 266
N2 110 P2 22049 S2 4474
N3 231 P3 22342 S3 11371
N4 187 P4 22918 S4 24228
N5 105 P5 24117 S5 25865
N6 162 P6 23920 S6 26194
N7 128 P7 20396 CV1 25762
N8 129 P8 23952 CV2 25385
N9 111 P9 24398 CV3 26122
N10 136 P10 25177 CV4 25314
N11 196 P11 24194 CV5 24917
N12 172 P12 24018 CV6 26138
N13 220 P13 24922 CV7 25599
N14 139 P14 24965 CV8 26105
N15 201 P15 24959 CV9 25444
N16 176 P16 25123 CV10 26237
N17 528 P17 25811 CV 1.72%
N18 322 P18 25534    
N19 157 P19 23840    
N20 304 P20 24188    

备注:以上是利用化学发光平台开发的试剂盒过SFDA的panel结果:

其线性相关性如下:

如何订购

1. 邮件订购:请点击此处下载“重组蛋白项目信息咨询单”,详细填写信息后,发送至邮箱protein@genecreate.com

2. 在线咨询:点击屏幕右侧“在线咨询”,或拨打咨询电话027-62431110,我们会尽快安排工作人员与您联系!

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