蛋白表达

蛋白表达

  • 5大表达系统
  • 多种表达载体
  • 上千个项目经验

服务特色

金开瑞蛋白表达平台可针对目的蛋白的特殊性质,专业解决蛋白表达相关难题,如蛋白产量较低、蛋白表达为包涵体、表达蛋白没有活性、表达特殊蛋白(如膜蛋白、毒性蛋白等)、制备蛋白复合物等,帮助您获得任意想要的蛋白。

服务介绍

蛋白表达是指用模式生物如细菌、酵母、动物细胞或者植物细胞表达外源基因蛋白的一种分子生物学技术。表达就是DNA上的基因转录成RNA再翻译成蛋白质的过程。蛋白质表达就可以将基因所控制的相应的(遗传)性状表达出来。

这些技术可以应用于生命科学研究、药物研发、诊断工具开发、工业生产以及生物能源研究等领域。目前,金开瑞蛋白表达平台已成功为全球各地客户提供3000余种重组蛋白产品,涵盖人类疾病相关蛋白(细胞因子、激素、酶、病毒抗原、重组抗体、片段抗体)、动植物蛋白和微生物蛋白。

服务流程

方案沟通
引物设计
载体构建
测序验证
蛋白表达
蛋白纯化

客户提供

① 目的基因序列信息

② 目的基因模板质粒

③ 模板质粒抗性信息

(若无模板质粒,可直接提供序列,由金开瑞进行基因合成)

最终交付

  • ① 重组质粒
  • ② 测序报告
  • SDS-PAGE检测
  • ④ 1mg纯品蛋白

服务说明

服务项目 服务内容 交付内容 服务周期
大肠杆菌表达系统 表达载体构建 重组质粒测序报告 1-2周
转化大肠杆菌及小量检测 SDS-PAGE检测图 2-3周
扩大表达1mg及蛋白纯化 1mg纯品蛋白SDS-PAGE检测图 2-3周
毕赤酵母表达系统

表达载体构建

重组质粒测序报告 1-2周

转化酵母G418平板

10株PCR鉴定及小量检测

PCR鉴定结果,小量SDS检测测结果 4-5周
扩大表达1mg蛋白纯化 1mg纯品蛋白SDS-PAGE检测图 4-5周
杆状病毒昆虫表达系统 表达载体构建 重组质粒测序报告 1-2周
小量表达 SDS-PAGE检测图 3-4周
lL细胞扩大培养及纯化 >100ug纯化后的蛋白 2-3周

无细胞表达系统

(体外大肠杆菌)

表达载体构建 重组质粒测序报告 1-2周
小量表达 SDS-PAGE检测图 3-4周
扩大1.5ml体系及蛋白纯化 1.5ml反应体系纯化所得蛋白 2-3周
哺乳(293t)表达系统 表达载体构建 重组质粒测序报告 2-3周
转染及小量表达 SDS-PAGE检测图 2-3周
lL细胞扩大培养及纯化 >100ug 纯化后的蛋白 3-4周
其他反应体系或蛋白量需求可进一步咨询

案例展示

常见问题与解析 (Q&A)

Q:金开瑞蛋白表达平台有哪些优势?

蛋白表达是现代工业、医疗和基础研究领域的重要组成部分,金开瑞蛋白表达平台可针对目的蛋白的特殊性质,专业解决蛋白表达相关难题,如蛋白产量较低、蛋白表达为包涵体、表达蛋白没有活性、表达特殊蛋白(如膜蛋白、毒性蛋白等)、制备蛋白复合物、特殊氨基酸标记技术等,帮助您获得任意想要的蛋白。 目前,金开瑞蛋白表达平台已成功为全球各地客户提供3000余种重组蛋白产品,涵盖人类疾病相关蛋白(细胞因子、激素、酶、病毒抗原、重组抗体、片段抗体)、动植物蛋白和微生物蛋白。 金开瑞目前主要提供普通型及上清保证型大肠杆菌系统表达蛋白服务,详情请参见蛋白表达-大肠杆菌表达系统。

Q:蛋白分泌表达的优点是什么?

1) 一些可被细胞内蛋白酶所降解的蛋白质分泌到周质或培养基中可增加其稳定性; 2) 有些在细胞内表达时无活性的蛋白分泌表达时能够按适当的方式进行准确折叠,增加到蛋白的活性; 3) 由于蛋白质信号肽和编码序列间被切割,所以分泌蛋白产物不含氨基酸起始密码子ATG所编码的甲硫氨酸,而甲硫氨酸会影响很多蛋白的活性。

Q:为什么蛋白表达出来了,SDS-PAGE检测时大小不符?

影响因素有以下几点: ① 染料:首先,预染的蛋白 marker 常用于 WB(免疫印迹)实验中,因为可以直观地看到蛋白各个条带的颜色,所以给电泳,转膜以及裁膜带来了很大的方便。蛋白通过标记上各种颜色的染料,去实现蛋白的可见性,因为标记效率以及染料本身的分子量和电荷,对最后的染料-蛋白复合物的分子量是有影响的。 ② 蛋白性质:蛋白本身氨基酸含量,带电荷的多少,是否带有蛋白后修饰以及蛋白疏水的性质等,会对蛋白在 SDS-PAGE 的迁移模式造成影响。 ③ 电泳缓冲体系:不同电泳缓冲体系和基质成分,也会对蛋白条带的迁移特性造成一定的影响。

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一、蛋白表达技术的实验流程

蛋白表达技术的实验流程可以根据具体的表达系统和实验目的有所差异,但一般包括以下主要步骤:

1、目标蛋白选择:选择要表达的目标蛋白,并获取其对应的基因序列或表达载体。

2、表达载体构建:将目标基因序列克隆到适当的表达载体中,以便在宿主细胞中进行表达。这可能包括插入目标基因、选择合适的启动子和选择适当的标签或报告基因。

3、宿主细胞转化:将构建好的表达载体导入到适当的宿主细胞中。根据表达系统的不同,可以选择大肠杆菌、毕赤酵母、哺乳细胞、无细胞系统或杆状病毒-昆虫表达系统等作为宿主。

4、培养和表达:培养转化后的宿主细胞,在适当的培养条件下进行蛋白表达。这可能包括调节培养基组分、温度、pH值、搅拌速度等参数,以促进蛋白质的高效表达。

5、收集和提取:在一定时间后,收集宿主细胞培养物,并进行细胞破碎或离心等处理步骤,以获得目标蛋白。

6、纯化和分析:通过蛋白纯化技术(如亲和层析、凝胶过滤层析、离子交换层析等)将目标蛋白从复杂的细胞提取物中纯化出来。随后,可以使用各种分析技术(如SDS-PAGE、Western blot、质谱分析等)对蛋白质进行鉴定和定量。

7、 功能和应用研究:对获得的目标蛋白进行功能和应用研究,如酶活性测定、结构分析、相互作用研究等,以了解蛋白质的性质和在相关研究领域的应用潜力。

 

二、蛋白表达技术的应用

1、生命科学研究:蛋白表达技术在生命科学研究中起到关键作用,用于研究蛋白质功能、相互作用、信号传导等生物学过程。

2、药物研发:蛋白表达技术用于生产重组蛋白药物,如重组抗体、蛋白激酶抑制剂等,用于治疗癌症、免疫性疾病和遗传性疾病等。

3、诊断工具开发:利用蛋白表达技术可以生产用于诊断的蛋白质标记物和生物传感器,如酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒等。

4、工业生产:蛋白表达技术在工业上用于生产酶、工业酶、发酵产物等,用于制药、食品工业、生物燃料等领域。

5、结构生物学研究:通过大规模蛋白表达技术,结合X射线晶体学或核磁共振等技术,解析蛋白质的三维结构,有助于理解蛋白质功能和药物设计。

 

表达系统

优势 缺点 适用范围
大肠杆菌表达系统

- 高表达水平

- 不适合复杂蛋白质的折叠和修饰 - 小型蛋白质

- 快速和简单操作

- 产生内毒素的可能性 - 非糖基化蛋白质

- 成本低

   

- 高扩展性

   
毕赤酵母表达系统

- 高表达水平

- 较长的表达时间 - 中大型蛋白质

- 蛋白质折叠和修饰能力相对较好

- 对蛋白质分泌的限制 - 糖基化蛋白质

- 稳定表达

   
哺乳细胞表达系统

- 可实现复杂蛋白质的折叠和修饰

- 较低的表达水平 - 大型蛋白质

- 真实蛋白质环境模拟

- 较高的成本 - 高度糖基化蛋白质
无细胞表达系统

- 不需要宿主细胞,避免细胞相关问题

- 受到蛋白质类型和复杂性的限制 - 简单蛋白质

- 简化纯化步骤

- 成本较高 - 不依赖蛋白质折叠和修饰
杆状病毒-昆虫表达系统

- 高表达水平

- 专用宿主细胞限制 - 大型蛋白质

- 蛋白质折叠和修饰能力相对较好

- 对昆虫细胞的依赖 - 糖基化蛋白质
- 稳定表达 - 成本较高

- 膜蛋白质

   

- 复杂蛋白质

 

请注意,虽然上述优劣势对比提供了一般性的指导,但具体选择还应根据实验需求、目标蛋白质的特性和研究的具体背景进行评估和决策。

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