多克隆抗体定制的采血方式与采血次数如何确定？

     多克隆抗体制备中，采血方式、次数需结合动物种类、免疫目的和伦理要求确定，单次抗血清量则完全依赖动物体重，具体细节如下：

一、采血方式的确定逻辑

     采血方式核心分两种，选择时主要看是“监测效价”还是“大量获取”，以及动物大小。

1、耳缘静脉采血（或外周静脉采血，如兔耳缘、山羊颈静脉）

     适用场景：主要用于免疫过程中的效价监测，比如首次免疫后2-3周，需要判断动物是否产生足够抗体时。

     选择理由：操作简单、对动物创伤小，能重复采血，不会导致动物死亡。适合大动物（如2-3kg的新西兰大白兔、20-30kg的山羊），方便长期跟踪抗体浓度变化，直到效价达标（通常≥1:10000）。

     不适用情况：小动物（如20-25g的小鼠）外周静脉太细，血量少，无法通过这种方式获取足量样本，也没必要用于监测。

 

2、心脏采血

     适用场景：仅用于终末大量采血，也就是抗体效价达标后，一次性获取最多抗血清的时候。

     选择理由：采血量远高于静脉采血，能最大化利用动物。尤其适合小鼠、大鼠这类小动物——它们总血量少，外周静脉采血几乎没意义，只能通过心脏采血获得可用量的抗血清。

     关键特点：采血后动物通常会因失血过多死亡，属于“一次性使用”，操作难度也更高，需要专业人员避免刺破心脏导致大出血。大动物（如兔）若需一次性大量采血，也可选择，但更常用静脉多次采血来兼顾效率。

二、采血次数的确定原则

     采血次数没有固定标准，完全跟着“免疫进度”和“动物类型”走，主要分两个阶段。

1、效价监测采血（1-3次）

     目的：确认动物是否产生特异性抗体，以及浓度是否够高。

     次数控制：首次免疫后2-3周采第一次；如果效价不够（比如＜1:5000），就加强免疫1次，1-2周后再采第二次；最多采3次，直到效价达标，之后就进入大量采血阶段。

 

2、大量采血（1-5次，看动物种类）

     大动物（兔、山羊）：若用静脉采血，效价达标后每隔3-5天采1次，每次采血量不超过动物总血量的15%（避免过度失血），总共能采3-5次，直到抗体效价明显下降；若用心脏采血，就只采1次终末血。

     小动物（小鼠、大鼠）：总血量太少，只能采1次心脏终末血，无法多次采。

 

三、单次抗血清量的参考范围

     抗血清是血液离心后去除红细胞的上清液，体积约为采血量的50%-70%，具体量因动物体重不同差异很大。

     1、新西兰大白兔（2-3kg）：耳缘静脉单次采10-20mL血液，能获得5-14mL抗血清；心脏终末采血能采80-120mL血液，对应40-84mL抗血清。

     2、小鼠（20-25g）：只能心脏采血，单次采0.8-1.2mL血液，仅能获得0.4-0.8mL抗血清。

     3、大鼠（200-300g）：心脏采血单次采5-10mL血液，能获得2.5-7mL抗血清；若用静脉采血，单次最多只能采0.5-1mL血液，抗血清量更少，几乎不用。

     4、山羊（20-30kg）：通过颈静脉采血，单次采50-100mL血液，能获得25-70mL抗血清，可重复采4-6次。