免疫组化染色(IHC)实验步骤
IHC免疫组化染色(Immunohistochemistry)是常用的组织学检测技术,用于检测组织中的蛋白质表达情况。
以下是一般的IHC实验步骤:
取得组织样本:通常是通过组织切片或细胞制备薄片来获取组织样本。
固定组织样本:使用适当的固定剂(如福尔马林)将组织样本固定在载玻片上,以保持其形态结构。
抗原回复:将组织样本进行抗原回复处理,以增强抗原的可用性。这一步通常涉及样本的加热处理(如高温蒸压或酶消化)。
阻断非特异性结合:使用非特异性抗体或其他方法,阻断组织中非特异性结合位点,减少假阳性结果。
孵育一抗:在特定条件下,使用特异性一抗与目标蛋白结合。这一步通常需要将载玻片放入含有一抗的缓冲液中,并进行适当的孵育时间和温度。
洗涤:将载玻片洗涤,去除无结合的一抗和非特异性结合物。
孵育二抗:使用与一抗体来源物种不同的二抗(如兔抗小鼠IgG)与一抗结合。二抗通常标记有染色剂(如酶、荧光剂等)。
洗涤:将载玻片洗涤,去除无结合的二抗体。
可视化:根据染色剂的类型,选择适当的检测方法进行可视化。例如,如果使用酶作为染色剂,则可以使用底物进行染色反应,形成可见的染色产物。
盖玻片:使用透明封盖胶或其他材料将载玻片盖好,以保护样本。
以上是一般的免疫组化染色步骤,具体操作可能会因实验目的、抗体选择和仪器设备等而有所不同。在进行实验前,请确保阅读并遵循相关实验室的操作规程,并遵守安全操作规范。
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