银染的灵敏度能达到多少？适合检测哪些浓度范围的蛋白样品？

    银染是聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）中常用的高灵敏度蛋白染色方法，其灵敏度和适用的蛋白浓度范围有明确的区间，同时受染色方案、凝胶类型和蛋白性质的影响。

一、银染的灵敏度

    银染的灵敏度远高于考马斯亮蓝染色，常规银染的检测下限为1–10ng蛋白，优化后的银染方案（如荧光银染、敏化银染）灵敏度可进一步提升至0.1–1ng蛋白。

    这个灵敏度差异主要源于染色原理：银染是通过银离子（Ag⁺）与蛋白中的羧基、氨基等基团结合，再经还原剂还原为金属银颗粒，形成肉眼可见的棕黑色或黄色条带，银颗粒的沉积具有放大效应，因此能检测到极低含量的蛋白。

    与之对比，考马斯亮蓝染色的检测下限约为50–100ng蛋白，银染的灵敏度是其10–100倍。

 

二、适合检测的蛋白样品浓度范围

    银染适合检测低丰度蛋白样品，对应的上样浓度范围需结合凝胶上样体积和蛋白分子量综合判断，常规SDS-PAGE中的适用范围如下：

 

1、总蛋白样品

    对于细胞裂解液、组织提取物等复杂总蛋白样品，银染适合检测浓度在0.1–10μg/mL的样品，上样体积通常为10–20μL，对应的上样总蛋白量约为1–200ng。若蛋白浓度过高，条带会出现弥散、拖尾，甚至形成黑色沉淀，掩盖低丰度蛋白的信号。

 

2、纯化蛋白样品

    对于纯化的单一蛋白，银染的适用浓度范围更宽，可检测0.01–1μg/mL的样品。例如分子量为50kDa的纯化蛋白，上样10μL浓度为0.01μg/mL的样品，对应蛋白量约0.1ng，仍可清晰显色。

三、注意事项

    银染的灵敏度受操作步骤影响极大，如固定液的成分、银染液的浓度、显影时间等，操作不当会导致背景偏高，降低实际检测灵敏度。

    银染存在一定的假阳性，部分核酸或多糖也可能被染色，因此用于蛋白检测时，建议先对样品进行脱核酸处理。