酵母单杂自激活的作用原理
酵母单杂自激活(yeast single hybrid self-activation)是指在酵母单杂筛选中,靶蛋白与报告基因启动子之间的结合能力足以促进报告基因的表达,而不需要与库融合蛋白相互作用的现象。其原理是:当靶蛋白与报告基因的启动子序列发生结合后,可以通过某种机制使启动子活性增强,导致这些启动子驱动报告基因的表达,从而产生假阳性信号。
当靶蛋白与报告基因启动子结合后,其可能会影响转录因子和其他调节蛋白与启动子的相互作用,从而改变启动子的开放状态,使RNA聚合酶能够更容易地实现起始转录,并产生报告基因信号。此外,靶蛋白与启动子的结合还可能涉及到某些辅助蛋白(如媒介转录因子、组蛋白修饰因子等)的协同作用,加快转录的发生。这些机制都可能会导致靶蛋白与启动子的非特异结合,并引起酵母单杂筛选的假阳性结果。
为了避免酵母单杂自激活的影响,研究人员通常会采用不同的控制和验证策略,如使用空载体、阴性对照(如与靶蛋白没有相互作用的蛋白)、限制报告基因的表达级别等来排除假阳性信号。此外,还可以对任何靶蛋白的阳性结果进行验证和确认,以确保筛选结果的准确性和可靠性。
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