测定蛋白质n端c端的方法
测定蛋白质的N端和C端可以使用多种方法,以下列出其中常用的几种:
一、N端测定方法:
(1)氨基酸序列分析:通过蛋白质分离、纯化和序列测定技术,可以分析得到该蛋白质的氨基酸序列信息,从而确定其N端序列。
(2)Edman 降解法:该方法利用Edman试剂(phenylisothiocyanate)将蛋白质N端上的氨基酸与试剂发生缩合反应,进而使N端氨基酸被移除并检测出来。该方法可用于测定多肽或短蛋白,但不能用于蛋白质较长的N端序列测定。
(3)质谱法:利用质谱技术对蛋白质进行离子化和分子量测定,可以得到蛋白质的氨基酸组成,从而推断出蛋白质的N端序列。
二、C端测定方法:
(1)肽片段分析法:将蛋白质水解成小肽段后,通过肽质谱分析可以得到含有C端的肽段,从而推断出蛋白质的C端序列。
(2)抗体检测法:利用具有高度特异性的抗体,可以检测出蛋白质的C端。例如,Western blot 和ELISA都是基于抗体检测的方法。
(3)质谱法:类似于N端测定,也可以用质谱技术来推断出蛋白质的C端序列。
不同的测定方法各有优缺点,科学家需要根据实验目的和蛋白质本身的特点选择合适的方法。
最新动态
-
09.30
免疫过程中若动物出现异常,多克隆抗体定制需如何调整方案?是否会影响最终抗体产量?
-
09.30
滚环扩增(RCA)技术能否用于长片段DNA合成?其通过环形模板实现DNA合成的原理与PCR扩增有何不同?
-
09.30
体外转录法siRNA合成后,为何必须进行DNase和磷酸酶处理?这些步骤如何影响siRNA的活性?
-
09.30
基因合成中“错误率”的主要来源是什么?常用的错误校正方法有哪些?
-
09.29
高通量筛选用DNA文库(如sgRNA文库)的DNA合成通常采用哪种技术路线?如何平衡DNA合成的成本与文库多样性?
-
09.29
高通量筛选用DNA文库(如sgRNA文库)的DNA合成通常采用哪种技术路线?如何平衡DNA合成的成本与文库多样性?
-
09.29
RNA合成产物的二级结构过强导致电泳条带异常,可通过哪些预处理?
-
09.29
合成多肽抗原的多克隆抗体定制,多肽序列设计需规避哪些风险?
-
09.28
基因合成在“定点突变”实验中,相比传统PCR定点突变法,有什么优势?(如多位点突变、大片段插入/缺失)
-
09.28
用于基因治疗的DNA合成产物,除序列正确性外,还需检测哪些指标(如内毒素、宿主菌残留、降解产物)以符合GMP标准?