如何解决ELISA试剂盒定制中常见的基质干扰问题?
信息来源:金开瑞 作者:genecreate_cn 发布时间:2025-05-22 17:02:30
1、基质干扰类型及对策
非特异性结合(血清 / 血浆):
原因:样本中的免疫球蛋白、补体蛋白与固相载体或抗体非特异性结合,导致背景值升高。
解决方案:封闭剂优化:使用5%脱脂奶粉+0.1%Tween-20封闭固相载体,减少蛋白吸附;样本预处理:用含0.5%BSA的PBS稀释样本,或添加阻断剂(如抗IgG抗体)中和非特异性抗体;洗涤强化:增加洗涤次数(5-7次),使用含 Tween-20 的洗涤液(0.05%-0.1%)破坏非特异性结合。
2、植物样本色素干扰
原因:叶绿素、类胡萝卜素等色素与底物显色产物(如TMB的蓝色)重叠,导致OD值读数偏差。
解决方案:样本脱色:用活性炭吸附或高速离心(12000g×10min)去除色素;改用化学发光法(CL-ELISA):以鲁米诺为底物,发光信号不受颜色干扰,灵敏度比显色法高 1-2 个数量级。
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