【直播】知无不“研”|基因合成之连接转化实验全程直播，点击快速预约

小金博士本月的直播来咯！

 

新一期的直播主题是“基因合成之连接转化”
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直播时间为4月27日（周四）19：00

  实验简介  

主题：基因合成之连接转化

    全基因合成是指在体外利用人工方法合成双链DNA分子的技术。基因合成无需模板，是获取基因的重要手段之一。目前该技术主要应用在克隆一些不易获取模板的基因、自然界不存在的新基因以及异源基因表达上，经常在对基因密码子优化后进行。简而言之就是将不同来源、具有不同功能的DNA序列组装在一起，以达到预设的目的。

    在这期间需要用到一系列的工具，包括试剂盒、缓冲液、酶等等，其中酶起决定性作用。

    一般包括扩增获取目的基因、载体处理、连接、转化。

    基因合成离不开质粒载体。质粒载体是指游离在宿主染色体DNA之外的环状、能够自主复制的DNA分子；绝大多数的策略需要将质粒载体线性化处理，以暴露其中能够与目的基因进行组装的部分。

    线性化的常用手段有酶切、PCR。

线性化载体的制备有两种：

    第一种是使用内切酶对克隆载体进行酶切，此方法的优点是载体的突变率较低，高保真，但缺点是酶切不完全会使假阳性克隆空载体的出现影响单克隆的鉴定。

    第二种是反向PCR扩增制备线性化克隆载体，再采用胶回收或者Dpn I消化以去除环状载体质粒模板的影响，此方法的优点是假阳性克隆较少，但缺点是因PCR扩增的条带较长，突变的概率也会相应增加。

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  直播预告  

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实验的操作流程与注意事项

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