iptg诱导蛋白表达的原理
IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)是一种化学试剂,常用于诱导蛋白表达。其原理是通过模拟天然的信号物质,活化在大肠杆菌中存在的lacZ操作子。
在大肠杆菌中,lacZ操作子是控制乳糖酶(β-galactosidase)基因表达的一段DNA序列。在正常情况下,lacZ操作子被represor(压制子)分子绑定所致的静默状态,从而抑制乳糖酶基因的表达。
当大肠杆菌生长在无乳糖或低浓度乳糖的培养基中时,lacZ操作子上的represor与其结合,形成复合物,阻止RNA聚合酶结合和转录乳糖酶基因。
而当添加IPTG到培养基中时,IPTG会与represor结合,导致represor失去对lacZ操作子的结合能力,解离出来。这样,RNA聚合酶可以结合到lacZ操作子上,启动乳糖酶基因的转录和翻译过程,从而诱导蛋白表达。
IPTG是一种人工化合物,与乳糖不同,大肠杆菌无法代谢IPTG。因此,添加IPTG不会改变细胞的营养状况,仅仅起到诱导蛋白表达的作用。
通过控制IPTG的浓度和处理时间,可以实现对蛋白表达的调控。这种诱导方式常用于表达外源蛋白、构建融合蛋白、进行蛋白纯化等实验和应用中。
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