1. 细胞迁移（Migration）：无基质胶，检测细胞自主运动、游走能力
2. 细胞侵袭（Invasion）：小室上铺Matrigel 基质胶，模拟细胞突破基底膜、降解基质、浸润转移能力

核心差异：侵袭需要降解基质胶，难度更高，反应肿瘤转移潜能更强

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• Transwell 小室（24 孔板，孔径常用 8 μm）
• Matrigel 基质胶（BD/康宁，-20℃分装保存，全程冰上操作）
• 24 孔细胞培养板、无菌枪头、PBS、多聚甲醛、结晶紫/吉姆萨染液
• 无血清培养基、完全培养基、胰酶

• 基质胶切忌常温融化，易凝固结块
• 结晶紫染液现配现用，过滤除杂质，避免背景脏

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1. 六孔板接种细胞，过夜培养至100% 汇合
2. 用 200μL 无菌枪头垂直均匀划直线，每孔划 3~5 条
3. PBS 轻柔洗 2–3 次，洗掉脱落漂浮细胞
4. 加入低血清/无血清培养基（抑制增殖，只看迁移）
5. 0h、12h、24h 显微镜拍照，固定视野
6. ImageJ 测量划痕宽度、计算迁移率

• 划线力度均匀，不要刮伤培养板底部
• 清洗轻柔，避免单层细胞大片脱落
• 必须低血清，防止细胞增殖干扰结果

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1. 细胞消化、离心，无血清培养基重悬，调整细胞密度
2. 下室（24 孔板）加入 600–800 μL 含 10% 血清完全培养基（趋化诱导）
3. 上室小室加入 200 μL 细胞悬液（常用接种量：5×10⁴～1×10⁵/孔）
4. 恒温培养箱孵育 12–24 h
5. 取出小室，PBS 洗 2 次
6. 棉签轻轻擦去上室内侧未迁移细胞
7. 4% 多聚甲醛固定 15–20 min
8. 结晶紫染色 10–15 min，清水洗净、风干
9. 显微镜随机 5 个视野拍照，计数、统计

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1. 基质胶 4℃过夜融化，冰上预冷枪头、EP 管
2. 无血清培养基稀释基质胶（稀释比例 1:8～1:10）
3. 每孔上室加 50–60 μL 稀释后基质胶，轻轻晃匀
4. 37℃培养箱凝固 3–4h或过夜，完全凝固再上细胞

侵袭孵育时间普遍比迁移更长

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实验类型	孔径	细胞接种量	孵育时间
划痕迁移	—	长满单层	12～24 h
Transwell 迁移	8 μm	5×10⁴~1×10⁵	12～24 h
Transwell 侵袭	8 μm	8×10⁴~1.5×10⁵	24～48 h

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• 细胞接种量过低
• 孵育时间太短
• 下室血清浓度太低，趋化力不足
• 细胞状态差、悬浮、活性低

• 降低细胞密度
• 缩短培养时间
• 适当降低血清浓度

• 全程冰上操作
• 稀释充分，加胶后轻轻摇匀
• 避免室温放置

• 结晶紫提前过滤
• 固定后 PBS 充分漂洗
• 风干再拍照，避免水渍

• 棉签稍微蘸湿 PBS，转圈轻柔擦拭
• 擦拭后多洗一遍

• 操作轻拿轻放，不要挤压小室
• 吸液、加液避免直冲膜面

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1. 拍照：每孔随机5 个视野，放大 100×/200×
2. 定量：人工计数 或 ImageJ 定量染色面积/光密度
3. 统计：对照组 vs 实验组，做 t 检验 / 方差分析

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