酵母双杂交原理及步骤

    酵母双杂交（Yeast Two-Hybrid，Y2H）是常用的蛋白质相互作用检测技术。其原理是利用酵母细胞内的转录因子分为DNA结合域（DNA-binding domain，BD）和激活域（activation domain，AD），将要研究的两个蛋白质分别与BD和AD结合，形成一个可激活报告基因表达的复合物，从而实现蛋白相互作用的筛选与鉴定。

酵母双杂交实验视频

    具体步骤如下：

    构建两个谷氨酸转移酶（glutathione S-transferase，GST）融合蛋白表达载体，其中一个蛋白BD-GST含有目标蛋白N端的BD序列，另一个蛋白AD-GST含有目标蛋白C端的AD序列。

    在酵母细胞中分别转化BD-GST和AD-GST重组载体，使其在同一细胞中表达。

    通过选择性培养基的筛选，筛选出可以形成复合物的融合蛋白，这些融合蛋白相互作用可激活报告基因表达并产生可观察的表型。

    确认相互作用是否真实存在，进行进一步的验证。

    通过这些步骤，我们可以筛选出蛋白质之间的相互作用，深入了解生物分子之间的调控机制。