Pull-down实验中如何提高互作蛋白的检出率？

1、标签与载体设计

        使用高亲和力标签：GST标签（结合谷胱甘肽树脂）比His标签（Ni-NTA）更适合弱互作。

        融合SUMO、MBP等可溶性标签，减少蛋白聚集。

2、反应条件优化

        缓冲液添加1 mM DTT防止二硫键错误折叠，0.1% Triton X-100增强膜蛋白溶解。

        降低盐浓度（如 100 mM NaCl）减少离子干扰，延长孵育时间至 4℃过夜。

3、检测方法升级

        结合质谱（LC-MS/MS）替代WB，可鉴定低丰度互作蛋白，但需设置Input对照。