分子互作实验结果出现假阴性的常见原因及解决方法?
信息来源:金开瑞 作者:genecreate_cn 发布时间:2025-06-17 14:12:00
原因 |
解决方案 |
抗体/标签亲和力不足 |
更换高亲和力抗体(如单克隆→多克隆),或改用GST标签(比His更适合弱互作)。 |
实验条件破坏互作 |
降低去污剂浓度(如 Triton X-100<0.1%),避免高温(4℃操作),添加蛋白酶抑制剂。 |
蛋白表达量过低 |
优化表达系统(如大肠杆菌改用昆虫细胞),或通过串联标签(His-GST)富集蛋白。 |
互作依赖翻译后修饰 |
加入磷酸酶抑制剂(如 Na3VO4),或在细胞中过表达修饰酶(如激酶)。 |
空间位阻干扰 |
截断蛋白结构域,定位关键互作区域(如通过结构预测去除柔性区)。 |
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