PKH-26染色适用于小动物活体成像吗？在干细胞或者其他细胞的标记并使用活体成像可以吗？

    PKH-26并不适合直接用于小动物活体成像，即便用于干细胞或其他细胞的标记，也仅能满足体外/离体成像需求，无法实现活体层面的有效检测，核心原因和实际应用限制主要体现在以下方面：

    PKH-26的光学特性与活体成像的天然矛盾，该染料是一种亲脂性的红色荧光染料，其激发波长约551nm、发射波长约567nm，属于可见光波段的荧光。而小动物活体成像中，可见光会被动物体内的组织（尤其是血液、肌肉、皮肤）大量吸收和散射，穿透深度极浅，仅能检测体表或极浅层的标记细胞，无法实现体内深部组织、脏器中标记细胞的示踪，这是其无法用于活体成像的核心短板。

    PKH-26的标记特性带来的干扰，该染料主要通过嵌入细胞膜的脂质双分子层实现细胞标记，标记后虽能随细胞分裂进行一定的荧光分配，但存在两个关键问题：一是荧光会随细胞分裂逐渐稀释，长期示踪时荧光信号会快速减弱，难以满足活体成像中对细胞长期示踪的需求；二是染料存在非特异性脱标风险，脱标的游离染料会在动物体内非特异性分布，产生背景荧光，干扰目标细胞的信号检测，降低成像的特异性。

    PKH-26本身无靶向性，仅能被动标记细胞，无法通过成像区分标记细胞的存活状态，死细胞的细胞膜破损后会释放染料，同样会造成背景信号污染，而活体成像的核心需求之一是实现对活细胞的精准示踪，这一点PKH-26也无法满足。

    在干细胞或其他细胞的标记应用中，PKH-26的使用场景也被严格限制：它可用于体外细胞标记后的培养观察、离体的组织切片荧光成像、体外细胞移植前的预实验等，比如体外观察干细胞的增殖、迁移，或移植后取动物组织做切片，通过荧光显微镜观察标记细胞的分布，这类场景无组织穿透的问题，能发挥其标记便捷的优势；但如果是将标记后的细胞移植到动物体内，想要通过活体成像系统实时示踪细胞的体内归巢、分布、增殖，PKH-26则完全无法实现。

    如果需要实现干细胞或其他细胞的小动物活体成像示踪，常规的替代方案是选择近红外荧光染料（激发/发射波长700-900nm，组织穿透深度深、背景荧光低）进行细胞标记，或采用慢病毒/腺病毒转染实现细胞的荧光蛋白（如mCherry、GFP的近红外突变体）稳定表达，也可结合核素标记（如18F、99mTc）、磁标记（如超顺磁性氧化铁颗粒，MRI成像）等方式，这类方法更适配活体成像的技术要求，能实现体内深部细胞的有效示踪。

    PKH-26是优秀的细胞体外/离体标记荧光染料，但因光学穿透性、荧光稳定性等问题，完全不适合小动物活体成像，也无法用于标记细胞后的体内活体示踪。