实时荧光定量PCR、数字PCR、传统PCR的区别

    传统PCR：只做扩增，终点检测，只能定性（有/无），不能定量。
    实时荧光定量PCR（qPCR/Real-time PCR）：扩增过程中实时检测荧光，可相对定量，是目前最常用的定量方法。
    数字PCR（dPCR）：把样品分到成千上万个微反应单元，单分子扩增，绝对定量，灵敏度极高。

一、核心区别对比

项目	传统PCR	实时荧光定量qPCR	数字PCR
检测时机	扩增结束后	扩增全过程实时	终点计数
定量能力	不能定量	相对定量	绝对定量
灵敏度	低	中	极高
精准度	差	较好	最高
抗抑制能力	弱	中	强
结果形式	条带有无	Ct值、相对表达量	直接拷贝数
成本	低	中	高
操作难度	简单	中	较高
主要用途	基因克隆、鉴定	表达量、病原体检测	微量突变、病毒载量、标准品定标

 

二、关键差异详解

1、传统PCR

    只扩增，不实时监测

    跑电泳看条带，只能判断有没有

    无法知道起始模板量

    适合：普通扩增、测序前准备、基因鉴定

 

2、实时荧光定量qPCR

    荧光信号随扩增实时增长

    用Ct值计算：Ct越小，起始模板越多

    只能算相对量（如：A是B的2倍）

    适合：基因表达、常规病原体检测、RNA定量

 

3、数字PCR

    把反应液分成几万滴/万个微孔

    每个单元要么扩增（阳性=1），要么不扩增（阴性=0）

    用泊松分布直接算出绝对拷贝数

    不需要标准曲线

    适合：

        极低丰度基因突变

        液体活检

        病毒绝对载量

        标准品校准

 

三、怎么选择适合的PCR？

    只想知道有没有？选传统PCR

    想知道多了多少倍？选qPCR

    想知道精确有多少个、样本特别少？ 选dPCR