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有问有答| 一起探讨基因合成、引物测序相关问题（分子讲座完结篇）

信息来源：金开瑞作者：genecreate 发布时间：2020-07-13 09:30:55

上期讲座Q&A

1、我想问下：为什么引物不能退火之后跑胶验证纯度呢？

两条引物退火成功率达不到百分之百，里面会存在单链引物，引物退火后跑胶有杂链很正常，不能以此来判断单链引物纯度。

2、老师您好，我想自己设计测序引物，请问对于测序引物有什么要求吗？

在待测目的基因前面100bp左右设计引物，GC含量不能太高或太低，3’端不能有错配，引物的长度建议是18-20bp以内。

3、甲基化的建议反向测序,是什么意思?

正向测序有甲基化的结构，会导致测序峰图双峰或者严重的时候导致信号突然中断，就可以反向测序，然后正反双向测序结果拼接起来就可以得到完整的序列。

4、老师请问一个测序反应有效的大概有多长?

普通序列一个测序反应有效长度大概是800bp左右。

5、RNA能合多少呢

30bp以内。

6、稀释后引物保存时间多久？

稀释后的引物一般4℃保存3个月内是没有问题的

7、你们的积分的兑换时间有限制吗？

积分不清零的

8、测序为什么前70bp不准呢

一代测序，由于仪器的缺陷，所以前面会有几十bp是不准确的，严重的时候会有70bp左右不准确。

9、引物最长能合多长呢？

引物最长能合139bp。

10、金开瑞引物合成与外面其他公司引物合成相比，优势有哪些？

我们公司技术服务内容比较多，内部和外部引物合成需求都是一起合成，效果和质量的反馈方面，我们综合有内部使用和外部使用反馈，更全面。

11、只做常规的pcr，用什么纯化方式的引物呢?

常规的pcr脱盐纯化就可以满足实验了。

12、引物测序时，单向、双向、测通之间的具体区别是什么呀？

这个主要是根据待测目的序列的长度来决定的，如果待测目的序列700bp以内的话可以选择正向或者反向都行；1500bp以内的序列一般双向测序就可以了；如果是待测目的序列大于1500bp就可以填测通，这边会根据测序结果自动安排测序反应，直到完全测通，我们会默认测通后拼接。

13、不同纯化方法,你们收费不一样是吗

不一样的，脱盐纯化<PEGA纯化<HPLC纯化。

14、金开瑞收到测序样品后一般最快多久出结果？

质粒和PCR产物24小时内出结果，菌液48小时内出结果。

15、讲座回放和PPT怎么获取？

讲座PPT获取方式：金开瑞微信公众号回复引物测序

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