抗体稀释和抗体滴度解析

抗体稀释
         抗体用途非常广泛（请见来邦的一篇总结文章 抗体应用）。多数商品化的抗体是纯化的，冻干或保存在缓冲液中。冻干抗体需要在用前在储存溶液中溶解一下。直接来自供应商或者重新溶解的抗体在储存溶液中的浓度（终浓度之前）可以是100 ug/ml, 200 ug/ml, 500 ug/ml或1 mg/ml。只有通过蛋白A纯化或亲和层析纯化时，抗体储备溶液的浓度才有意义。如果抗体未被纯化，则抗体储备溶液的浓度只能表示大量不相关蛋白质的一般浓度。这一点对于抗体的成本计算非常重要。为了方便比较，药物单克隆抗体通常配制为大于100 mg / ml浓度 [1] 。
 
         血清、腹水或者细胞培养上清中的未纯化抗体，或者更多情况是在缓冲液或重溶解的纯化抗体，需要根据不同用途稀释到一定的终浓度。抗体的终浓度很重要。它不仅取决于抗体和靶表位的亲和能力，也取决于抗体与其他抗原的非特异性结合（就是交叉反应）。非特异性结合导致背景污染。抗体亲和能力越强，终浓度越低；交叉反应越弱，终浓度越低。如果浓度太高，背景太亮而且也越浪费；如果浓度太低，目标蛋白或抗原就不能被检测到了。抗体浓度需要根据不同样品不同应用进行优化，来获得最佳的信号-背景比。
 

应用	抗体终浓度(ug/ml)
	0.00-0.09	0.1-0.9	1-10	10-99	100+
免疫印迹	63	468	574	56	36
酶联免疫吸附试验	12	131	299	38	25
免疫组化	9	106	473	107	62
免疫组化 冷冻	0	17	104	38	1
免疫组化 石蜡	12	58	206	70	25
免疫细胞	7	78	612	184	34
中和/封闭	8	103	493	482	84
免疫沉淀	0	15	54	25	12

 
         在文献中，最常用到的是比例标记1:100和1:1000。来邦的抗体稀释数据表明在25004篇文献中有124983个抗体应用给出了稀释信息，其中117783个用到了比例标记，1:1000的有28991个案例，1:100的有17881个案例，1:200的有14916个案例，1:500的有14741个案例。这一稀释方式只能用于某一抗体特定母液中，不能推而广之用于其它情况。例如，抗体母液浓度100 ug/ml按照1:100比例稀释与1 mg/ml母液浓度的抗体按照1:1000稀释得到的终浓度是一样的(1 ug/ml)。来邦的稀释数据中有6216个案例给出了终浓度。表一列出了根据这些案例统计的不同应用下抗体浓度的分布情况。表二列出了单克隆在不同应用下抗体浓度的统计情况。总体而言，1 ug/ml和2 ug/ml是几乎所有应用最常用的浓度值，应该被用作滴定实验的起始点。
 

应用	抗体终浓度(ug/ml)
	0.00-0.09	0.1-0.9	1-10	10-99	100+
免疫印迹	24	150	249	19	11
酶联免疫吸附试验	2	58	179	20	17
免疫组化	6	69	238	42	31
免疫组化 冷冻	0	7	54	19	0
免疫组化 石蜡	10	25	92	45	12
免疫细胞	4	50	206	63	11
中和/封闭	8	103	493	482	84
免疫沉淀	0	12	33	7	3

 
         针对特定实验某一抗体的理想浓度应该通过梯度稀释母液进行滴定实验得出。针对流式细胞实验，严格的统计学标准被用于指定合适的抗体浓度 [2] 。在免疫组化滴定实验中，则用逐级稀释的抗体重复染同一组织来进行评定 [3] 。
 
抗体滴度
免责声明: 本文非医药建议，任何个人怀疑或者得了某一疾病都应该咨询有资质的医学专家。本文仅供对了解多种疾病临床诊断有兴趣的个人参考。抗体滴度和抗体稀释是不同的概念，它被用于传染病和其他疾病的诊断。下面讨论一些常见问题。
 
抗体滴度如何测量？
         抗体滴度是血液样品中抗体水平的指标，被定义为血液样品能够被ELISA等实验检测到阳性结果的最大稀释浓度。某一抗体的精确滴度值取决于被检测抗体、所用方法以及进行检测的实验室。
 
核酸/抗核抗体
         核酸或抗核抗体被用于自身免疫疾病的诊断，更常用于系统性红斑狼疮的诊断。检测通过间接免疫荧光显微镜或ELISA进行。间接免疫荧光分析常被用于人肿瘤细胞系HEp-2的诊断,1:80或更高的滴度可认定为阳性 [4] 。另一方面，如果荧光分析被用于啮齿类组织基质中，1:20或1:40或更高值可被认定为阳性 [4] 。
 
乙肝抗体
        有几种针对乙肝的抗体在急性慢性肝炎的诊断和预后中会被检测到。它们包括针对乙肝表面抗原的抗体(anti-HBs), 抗乙肝核心抗原的IgM抗体(IgM anti-HBc), 抗乙肝核心抗原的IgM和IgG抗体(anti-HBc),以及抗乙肝e抗原的抗体。这些抗体的应用综合资源可以在这里查到 CDC。通常这些抗体的检测需要遵守标准的、获批的，且通常自动化的分析系统，例如Abbott Architect Anti-HBc II用于HBc抗体检测 [5] ，或者Bio-Rad MonoLISA 的HBs抗体检测试剂盒 [6] 。
 

参考文献

1. Das N. Commercializing High-Concentration mAbs. BioPharm International. 2016;29(11):2016.

2. Collino C, Jaldin Fincati J, Chiabrando G. Statistical criteria to establish optimal antibody dilution in flow cytometry analysis. Cytometry B Clin Cytom. 2007;72:223-6

3. Smith A. Finding the best antibody dilution by repeated immunostaining of the same tissue section. Biotech Histochem. 2014;89:215-9

4. Kavanaugh A, Tomar R, Reveille J, Solomon D, Homburger H. Guidelines for clinical use of the antinuclear antibody test and tests for specific autoantibodies to nuclear antigens. American College of Pathologists. Arch Pathol Lab Med. 2000;124:71-8

5. Ismail A, Devakumar S, Anantharam R, Fletcher G, Subramani T, John G, et al. Low frequency of occult hepatitis B infection in anti-HBc seropositive blood donors: experience from a tertiary care centre in South India. Blood Transfus. 2012;10:230-2

6. Behzad Behbahani A, Mafi Nejad A, Tabei S, Lankarani K, Torab A, Moaddeb A. Anti-HBc & HBV-DNA detection in blood donors negative for hepatitis B virus surface antigen in reducing risk of transfusion associated HBV infection. Indian J Med Res. 2006;123:37-42

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