双荧光素酶报告系统

    双荧光素酶检测是转录调控研究中十分重要的实验手段，主要应用于启动子和转录因子，以及miRNA和其靶基因互作的验证。

    在双荧光素酶检测中，将萤火虫荧光素酶作为实验报告基因，海肾荧光素酶作为对照报告基因。实验报告基因用于测试实验条件下基因的表达，而对照报告基因作为内对照。

    以荧光素为底物来检测萤火虫荧光素酶活性，荧光素酶可以催化荧光素，在荧光素氧化的过程中会发出生物荧光，然后通过化学发光仪测定。

    microRNA靶基因包括mRNA、lncRNA、circRNA。对于microRNA表达量较高的细胞，可以同时构建microRNA的inhibitor进行验证。

双荧光素酶实验的其他应用：

    1. 启动子结构分析：将待测启动子区域序列进行分段截短，或对特定位点进行突变，再分别插入报告基因上游，检测其启动子的活性。

    2. 启动子SNP分析：一些基因的启动子区域存在单核苷酸多态性，将待测启动子插入报告基因上游，检测萤光素酶活性，从而判断这些启动子的相对活性。