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Q:类器官培养过程中,提取原代细胞后,红细胞需要去除吗?

肿瘤组织中本身含有(如:肝,肺等组织)大量红细胞。首先,可以在拿到组织后尽量多清洗几次,能够去除大部分的红细胞;其次,可以使用商品化的红细胞裂解液,也可以不做红细胞处理。

Q:类器官的生物学重复如何界定?

传统2D培养为3复孔重复,类器官的生物学重复目前为两种观点:1.按照2D培养方法设置重复孔来进行生物学统计,2.每个类器官可认为是一个独立个体,根据研究目的来设置。按照目前的文献发表和数据支撑,第一种为目前的主流观点。

Q:目前可以通过那些手段辅助鉴别类器官?

目前通用的是明场显微镜和病理染色观察形态;结合基因测序可以鉴定所培养的类器官是否有丢失和供体来源的一致性。

Q:如何避免原代培养中的污染问题?

动物源性的样本一般比人源的更容易污染,尤其是一些胃肠、泌尿系统,培养过程可以添加3-5%庆大霉素或者青链霉素,实验室常用抗真菌试剂。

Q:类器官培养冻存后一般可以传几代?冻存需要有特殊的细胞冻存液吗?

主要看类器官的干性,干性比较好可以传20代以上;冻存液需要类器官专用的无血清冻存液。

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