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Q:EMSA的应用在哪些地方?

凝胶迁移或电泳迁移率检测(Electrophoretic Mobility Shift Assay,EMSA)是一种检测蛋白质和DNA序列相互结合的技术,可用于定性和定量分析;目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用,是转录因子研究的经典方法。 金开瑞提供EMSA检测技术服务,帮助您检测DNA结合蛋白、RNA结合蛋白、特定的蛋白质,并可进行未知蛋白的鉴定。

Q:supershift EMSA是指的什么?

当客户用组织或细胞核蛋白进行实验时,无法确定与探针结合的具体蛋白,需要再提供要研究的抗体,再进行supershift实验。如果抗体能识别与探针结合的蛋白,则会出现一条超迁移条带,即可证明探针与蛋白的结合。需客户提供IP级别的抗体。

Q:EMSA实验所用蛋白如何获得?

使用天然组织细胞样本进行实验,通过抽提核蛋白获取目的蛋白,此为混合蛋白,如要确定某个蛋白结合于探针时,需要加入抗体观察是否形成超迁移条带。可以通过重组蛋白表达系统(如金开瑞的大肠、酵母、哺乳、无细胞等)获得特定的重组蛋白,后续实验中如出现迁移条带,则应源于该蛋白的结合作用。

Q:EMSA实验存在哪些主要风险?

除了探针序列具有理论预测性、本身属于探索性实验的情况之外,组织细胞中该转录因子丰度较低、只在特定条件阶段表达,特定蛋白同DNA结合需要一定的离子或辅助因子条件(如Mg2+、Zn2+、ATP),重组表达蛋白在DNA结合活性方面同天然蛋白存在差异,结合力较弱,需要其他蛋白间接作用于DNA等情况下,都难以获得迁移条带。此外,当研究的蛋白本身pI较大(如大于8.0),蛋白在native电泳中将难以随同DNA一起向阳极泳动,或在电泳最初阶段同DNA解离开。

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