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有问有答| 一起探讨基因合成、引物测序相关问题

信息来源：金开瑞作者：genecreate 发布时间：2020-07-06 14:21:49

上期讲座Q&A

1、非模式菌株也公司可以进行密码子优化吗？表达基因不也得看宿主吗？宿主如果是不常用菌株？

答：目前我们的优化系统中有常用的几十种宿主，如果要优化的宿主不在系统中，可以去网站中或者文献中查找对应宿主的密码子使用频率表然后导入软件中优化。

2、怎么避免表达蛋白的移码突变？

答：目的基因插入载体中选择酶切位点时要注意不能移码，如果选择的酶切位点不是与载体上阅读框同框的话，要进行补位。

3、移码突变是怎么产生的？

答：目的基因插入载体中选择的插入位点与载体上的阅读框不同框，就会出现移码。

4、表达载体本来是要转入BL21进行表达的。但是如果转入DH5α中，会有克隆长出吗？

答：会，表达载体都是穿梭载体，既可以在克隆菌株中复制，也可以在表达宿主中表达。但长出的克隆只能复制质粒，不能做表达。

5、同一质粒载体上加入多个基因在后续基因前要单独加入RBS序列吗？不是融合表达，是串联共表达的

答：原核中可以把多个基因放在一个启动子下游，这样会转录出一条mRNA链，融合表达。但要注意启动子的强度，串联的基因大太，对一些比较弱的启动子效果会不太好。大肠杆菌中经典的多顺反子就是乳糖操作子。

6、为什么我构建的载体摇菌抽提质粒，跑琼脂糖凝胶有时候会有一到三条不等的亮带？

答：正常质粒是闭合的双链DNA。在电泳过程中可能使质粒发生开环，或者由开环解开螺旋变成线形。三种构像的质粒在琼脂糖电泳的前后顺序是超螺旋>线形>开环。

7、表达基因的密码子优化，就是氨基酸不变，因为每个氨基酸可以有不同的碱基表达，变化碱基，可以这样理解？

答：对,密码子的简并性，一个氨基酸往往对应多个密码子。

8、双酶切位点后变成线性质粒，跑的比未酶切的质粒的快还是慢？

答：未酶切的质粒在电泳过程中可能使质粒发生开环，或者由开环解开螺旋变成线形。三种构像的质粒在琼脂糖电泳的前后顺序是超螺旋>线形>开环。双酶切位点后变成线性质粒，电泳速率与未酶切的质粒的线型状态基本一致。

划重点

1微信公众号回复：基因合成，即可获得讲座PPT

2昨晚讲的转化实验，pcr实验和q-pcr实验不会的老师可以进入实验教程视频学习～

3讲座回放还是在左下角哦⊙∀⊙！

下期预告

1讲座主题：引物和测序基本原理及应用研究

2直播时间：2020年7月8日 19:30-20:30

3主讲嘉宾：熊双，金开瑞分子生物学中心技术支持工程师