超滤离心管，90% 的实验失败都出在这 5 件事上

一支小小的超滤管，能让 10 mL 珍贵样品半小时内浓缩到 200 μL，也能因一个细节让一周的培养前功尽弃。我们把说明书里最容易被忽略、也最容易踩坑的部分提炼成了这篇，建议收藏后对照操作。

01、先选对：MWCO 决定成败

截留分子量选小了浓缩慢，选大了目标蛋白直接穿膜跑掉。经验法则是目标分子量 ≥ MWCO × 3：IgG（150 kDa）选 30 或 50 kDa，IgM（900 kDa）选 100 kDa，常规酶（50–100 kDa）选 30 kDa。若对回收率要求高，建议同时测试相邻两个规格——球形蛋白与线性多肽的实际截留行为并不相同。

02、用前必做：预润洗与检漏

PES 膜出厂时携带微量甘油等保孔剂，不洗掉会污染样品。角转子加 12 mL、水平转子加 15 mL 缓冲液或超纯水，盖紧后倒置 5–10 秒检查渗漏，再 2000–2500 × g 离心 5–10 分钟倒掉。这一步同时验证密封性并让膜充分润湿、达到最佳流速。膜一旦湿润必须始终保持湿润，暂不使用时保留缓冲液在膜面，4 ℃ 存放。

03、五条红线，一条都不能碰

04、回收率从 80% 到 95% 的关键一步

上腔最后残留的 50–100 μL 最难回收。秘诀是：末次离心后加入 100–200 μL 缓冲液轻吹几下再吸出，回收率可从 80% 升至 95% 以上。另两个习惯同样值钱——起始蛋白浓度保持在 1 mg/mL 以上以减少膜吸附；滤液先留、确认效果后再丢弃，这是保护珍贵样品的最后一道保险。

05、脱盐与置换：三次才够

先浓缩至原体积的 1/3–1/2，倒掉滤液，补入等体积目标缓冲液混匀，再次浓缩——重复至少 3 次，置换率可达 99% 以上。起始与最终缓冲液 pH 差应 ≤ 1 个单位，否则蛋白易中途析出；高盐样品（> 500 mM）先稀释 2–3 倍再上管。离心温度建议 4–10 ℃，既护蛋白又降黏度。

06、能重复使用吗？

明确回答：这是非无菌的一次性耗材，官方建议一次性使用；科研发表、临床与 GMP/GLP 实验必须一次性使用并留样追溯。仅在探索性、非发表且已评估交叉污染风险时，同一蛋白与缓冲液体系内可谨慎复用，流速降至初始 60% 即丢弃。清洗流程：0.1 M NaOH 室温浸泡 20 分钟 → 去离子水颠倒冲洗 3 次 → 20% 乙醇浸泡 4 小时以上 → 4 ℃ 湿润保存。此外严禁高温高压灭菌、长时间紫外照射或酒精浸泡，也不可用次氯酸钠等强氧化剂，这些都会破坏 PES 膜。

07、存档备忘

未开封常温干燥保存，有效期 3 年；开封后封好袋口，建议 3 个月内用完，堆叠不超过 5 层，相对湿度 < 70%。清洗复用的管子保存不超过 7 天（4 ℃、密封、浸润 20% 乙醇或缓冲液）。产品内置约 200 μL 物理止滤点，可防止过度浓缩；常规样品 20 分钟完成过滤，30–40 分钟达最低浓缩体积。