GFP抗体应用及常见问题解答
信息来源:金开瑞 作者:genecreate 发布时间:2018-12-10 16:51:54
绿色荧光蛋白(GFP)是来自维多利亚多管发光水母 Aequorea victoria的一个小分子量蛋白质。它是由Osamu Shimomura发现的,当被蓝色到紫外区的光刺激时发出绿色荧光。相关荧光蛋白在许多其它海洋生物中发现,例如珊瑚,海葵和海紫罗兰。GFP非常适合用于蛋白质标记,这是它取得空前成功的最大原因之一。虽然它非常适合实时成像,但是在使用方法中如果导致GFP荧光淬灭,那么就有必要使用抗GFP抗体。组织样品,组织学制剂和使用固定剂的冷冻保存,通常导致GFP荧光完全或部分损失,则需要使用GFP抗体来获得可靠的实验结果。通过免疫印迹检测GFP标签蛋白,免疫沉淀检测蛋白质-蛋白质相互作用,这些实验也必须使用GFP抗体。GFP抗体有多克隆或单克隆抗体,适用于蛋白质印迹,免疫沉淀,免疫组化,免疫细胞化学定位和免疫吸附测定(ELISA),以检测GFP,GFP变体和GFP融合蛋白。
GFP抗体使用量在增长,相应供应商的数量也在增加,有些供应商还提供GFP单结构域抗体或纳米抗体。这些抗体包括一个单一可变抗体结构域,这是一种骆驼来源的单结构域抗体。这些抗体比常规抗体小得多,而且有重要的用途。 Caussinus E等人已经率先发明deGradFP方法,该方法利用遗传编码方式,具体为在任何真核系统中,快速消耗GFP标签蛋白。此系统依赖于GFP单结构域抗体片段(vhhGFP4)融合到F-box结构域。此融合蛋白结合GFP并直接介导蛋白酶体降解。当GFP标记的蛋白是功能蛋白的唯一来源,那么基因功能的分析就不受残留蛋白的干扰。Ries等人使用GFP标签蛋白和分子量小、亲和力高的单结构域GFP抗体,在微管,神经元和酵母细胞研究中获得纳米级的分辨率。

关于GFP抗体的常见问题
我应该购买哪些供应商的GFP抗体?
GFP抗体的使用方法是决定供应商的一个重要因素。供应商列出抗体最合适的使用方法,并且给出建议的稀释度。然而,抗体性能可能与系统和实验条件有关。许多供应商提供客户支持服务,这可以就他们公司抗体是否适合您的实验来给出建议。
GFP抗体也是别GFP变体吗?
GFP抗体识别维多利亚多管发光水母(Aequorea victoria)GFP蛋白的其它变体。
为什么免疫印迹实验中GFP抗体无信号?
免疫印迹实验中的信号缺失可能存在多种问题。转膜失败和转膜效率极差都导致无信号。转膜效率可以通过丽春-S染色进行检测。气泡的存在也会导致转膜效率差。GFP标记蛋白的表达水平可能太低,提高上样体积,并包含阳性对照。抗体浓度非常稀也可能是个问题,多试几个不同浓度的抗体来检测免疫印迹。此外,一个极小的可能性是,GFP标签没有同步表达和不表达也可导致信号缺失。
GFP信号太弱无法成像,是否可以增强信号?
在某些实验条件下,GFP荧光会部分或完全丢失。因此,表达GFP标记蛋白的一些细胞结构可能难以显现或成像。GFP-Booster是骆驼来源的VHH结构域结合蛋白耦合了强信号荧光染料,能稳定并增强荧光信号。
最新动态
-
06.27
Foods | 黑果枸杞类外泌体提取工艺优化及其对HT22细胞中AB诱导的细胞凋亡和氧化应激的抑制作用
-
06.23
科研小白必看的Co-IP结果解读
-
06.19
史上最全的ATAC-seq实验技术详解
-
06.19
INT J NANOMED | 源自鹿茸间充质干细胞的外泌体可以促进伤口愈合
-
06.19
Nutrients |葱衍生的外泌体样纳米颗粒可防止谷氨酸触发的铁性细胞死亡
-
06.09
表观遗传学”新宠“ - CUT&Tag技术
-
06.09
蛋白互作研究利器:Co-IP实验的核心要点
-
06.09
Int J Nanomedicine|连翘来源外泌体:一种用于有效肿瘤光动力治疗的新型天然光敏剂
-
06.09
Food Science & Nutrition |石榴来源的外泌体样纳米囊泡在脂肪性肝病中的治疗潜力
-
05.21
【避坑指南】EMSA实验全攻略 梯度探针设计