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EMSA电泳迁移率实验

信息来源：金开瑞作者：genecreate 发布时间：2022-12-05 10:51:33

一、凝胶迁移或电泳迁移率实验介绍

凝胶迁移或电泳迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay，EMSA)是一种研究蛋白质和DNA序列相互结合的技术，可用于定性或定量分析。

二、EMSA原理简介

蛋白质可以与生物素标记的核酸探针结合，电泳时这种复合物比无蛋白结合的探针在凝胶中泳动的速度慢，即表现为相对滞后。

目的蛋白与生物素标记的DNA探针结合，电泳时蛋白-DNA复合物比无蛋白结合的DNA探针在凝胶中泳动的速度慢，显影出现相对滞后条带。

三、EMSA类型

1、验证型EMSA

用于验证探针是否含有可与蛋白质结合的位点。将结合位点突变，以突变探针为对照，野生型探针出现迁移条带，而突变探针未出现迁移条带，则说明该探针含有可与蛋白质结合的位点。

2、竞争型EMSA

探针序列不变，不含修饰基团的探针称为冷探针。冷探针与标记探针竞争性地与蛋白结合，冷探针不显影出迁移条带。以冷探针为对照，标记探针出现迁移条带，而冷探针迁移条带减弱或消失，则排除了假阳性干扰，增加实验结果准确性。

3、超迁移EMSA

使用目标蛋白的特异性抗体，蛋白-探针复合物被抗体识别并结合，该三聚复合物在凝胶电泳中，迁移速率再次增大，出现在蛋白-探针复合物的上方的超迁移条带，验证了探针与目的蛋白的特异性结合。

四、电泳迁移率实验注意事项

● 亦可用于研究RNA结合蛋白和其相关RNA序列的相互作用。

● 如需要做超迁移，需提供IP级别的抗体。

● EMSA与酵母单杂交，可共同验证同一个问题。

五、项目流程

六、报价与周期

● 提取总蛋白

项目	数量	单价	总价	周期
蛋白提取与WB验证	1	300	300	5
DNA探针合成（<60bp）	1	450	420	12
EMSA	1	4500	4200	20
报价			5250	37
优惠价			3675	37

● 蛋白表达与纯化

项目	数量	单价	总价	周期
基因合成	n	0.8	0.8*n	15
载体构建与足量提取	1	800	800	5
小量表达	1	800	800	10
大量表达及纯化	1	4000	4000	18
DNA探针合成（<60bp）	1	450	450	12
EMSA	1	4500	4500	20
报价			10550+0.8*n	68
优惠价			6875+0.8*n	68

文献分享

Nuclear factor kappa B/p65 plays a positive role in peroxisome proliferator-activated receptor δ expression in orange-spotted grouper , Epinephelus coioides.

期刊：Fish and Shellfish Immunology IF：3.298 发表时间：2020

Binding reactions of Ecp65 and EcPPARδ promoter. Biotin-labelled EMSA probes are incubated with lysates of HEK293T cells including Ecp65 protein. WT, wild-type probe; MT, mutated probe. Positive control indicates EcPPARδ+Protein, negative control indicates EcPPARδ-WT.

文章中EMSA实验由本公司提供相关服务。

Functional Analysis of IRF1 Reveals its Role in the Activation of the Type I IFN Pathway in Golden Pompano, Trachinotus ovatus (Linnaeus 1758).

期刊：Int J Mol Sci. IF：4.183 发表时间：2020

Binding reactions of IRF1 and ToIFNa3 prompter. Biotin-labeled EMSA probes were incubated with lysates of HEK293T cells containing ToIRF1 protein.WT,wild-type probe;MT:mutated probe.1,negative control;2,positive control;3,plus ToIFNa3-P2-WT5;4,ToIFNa3-P2-WT5 plus ToIRF1-Flag;5,plus ToIFNa3-P2-MT5;6,ToIFNa3-P2-MT5 plusToIRF1-Flag.

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