腺相关病毒包装简介

技术背景：
        腺相关病毒（adeno-associated virus，AAV），属于微小病毒科(parvovirus)，为无包膜的单链线状DNA病毒，需要辅助病毒（通常为腺病毒）参与复制。AAV的基因组约4800bp，两个ITR序列和两个开放阅读框。AAV具有多种常见血清型，100多种病毒变种。其中AAV2是目前应用最广的腺相关病毒，对多数常见细胞均有较好效果。
重组腺相关病毒载体(rAAV)源于非致病的野生型腺相关病毒，由于其安全性好、宿主细胞范围广(分裂和非分裂细胞)、免疫源性低，在体内表达外源基因时间长等特点，被广泛用于体内实验研究，且腺相关病毒载体已成为世界上最常用的基因治疗载体之一。腺相关病毒载体整合率远低于慢病毒载体，但其可以以染色体外形式长期(数月至数年)存在于非分裂细胞中，从而实现外源基因长期表达。
 
技术原理：
        常用腺相关病毒载体系统AAV Helper-Free System，能产生AAV2血清型病毒而无需辅助病毒。该系统包含3个质粒：1个重组表达质粒和2个辅助质粒。将目的基因克隆至重组pAAV载体上；将AAV感染必须的腺病毒基因（E2A、E4及VA等）构建至辅助质粒pHepler上，将AAV复制基因rep和capsid结构基因cap构建至质粒pAAV-RC上。三质粒共转染表达腺病毒E1基因细胞，在细胞中进行病毒的包装。通过裂解细胞，离心取得上清液后进一步浓缩纯化，收集病毒。
 
技术特点：
1、安全，AAV不参与任何疾病的发生，已经用于临床疾病治疗；
2、感染范围广，可以用于神经系统、眼睛、心肌、肝脏、肌肉和肺部定位注射或定向给药；
2、滴度高，颗粒小，扩散能力强；
3、表达稳定，可持续半年以上；
4、外源基因定向重组，免疫原性低，极少发生非特异反应和免疫抑制，适合于进行基因治疗研究。
 
技术流程：
1、病毒载体构建
2、腺相关病毒包装
3、腺相关病毒浓缩与纯化
4、病毒滴度检测
 
腺相关病毒包装常用质粒图谱：